β-甘露聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达.pdfVIP

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2017-08-13 发布于北京
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β-甘露聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达.pdf

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2012-08-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2012.00672 / Chin J Appl Environ Biol 2012 18 ( 4 ) : 672~677 应用与环境生物学报， β -甘露聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达* 刘项羽徐美娟杨套伟张显饶志明** （江南大学工业生物技术教育部重点实验室和江南大学应用微生物与代谢工程研究室无锡 214122） Bacillus subtilis JNA 3-10 β - manA1 β - 摘要从中克隆出甘露聚糖酶基因成熟肽链编码序列和含信号肽的甘露聚糖酶 manA2 B. subtilis 168 β - BPM1001 pMA5- 基因，在中克隆表达，分别筛选获得高效分泌表达甘露聚糖酶的重组菌株（ manA1/ B. subtilis 168 BPM1002 pMA5-manA2/B. subtilis 168 BPM1002 BPM1001 ）和（），结果表明菌株总酶活力是菌株的 9.65 13.1 . manA2 His β - manA3 168 倍，是原始菌株的倍在基因下游引入序列克隆出甘露聚糖酶基因，获得枯草芽孢杆菌重组菌株BPM1003. 采用Ni-NTA柱纯化重组菌株BPM1003分泌表达的β -甘露聚糖酶，并研究其酶学性质，该酶促反应的最适pH为6.5，最适温度为65 ℃，在37 ℃条件下保存一个月酶活力依然保留有77.8%. 5 L发酵罐放大实验结果表明魔芋粉对于产β-甘露聚糖酶具有明显的诱导作用，酶活力最高可达2 748.82 U/mL. 图9 表3 参 19 关键词 β -甘露聚糖酶；枯草芽孢杆菌；信号肽；克隆；表达；重组菌株；酶学性质 CLC Q939.97 : Q78 Cloning and Expression of β -mannanase Gene in Bacillus subtilis* LIU Xiangyu, XU Meijuan, YANG Taowei, ZHANG Xian RAO Zhiming** (Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education; Laboratory of Applied Microorganisms and Metabolic Engineering, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu,