根癌农杆菌介导的植物遗传转化研究.pdfVIP

大田农艺 根癌农杆菌介导的植物遗传转化研究 刘立全 杨剑超 张 衡 杨 菲 渊山东师范大学袁山东济南 250014冤 摘要 介绍了农杆菌介导的植物原位转基因方法发展状况尧技术环节以及在转化机制上的研究结果袁并对存在的问题以及应用前景 进行了讨论遥 关键词 根癌农杆菌曰植物曰遗传转化 中图分类号 Q943.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739渊2009冤11-0143-01 Knowledge of Plants Genetic Transformation by Agrobacterium LIULi-quan YANGJian-chao ZHANGHeng YANGFei 渊ShandongNormalUniversity袁Jinan Shandong250014冤 Abstract Thedevelopmentstatusofagrobacteriummediatedinplanttransformationwasreviewedincludingtheprimaryprinciples袁technique know-howandkeyinfluencefactors.Alsotheproblemsandpotentialapplicationwerediscussedindetail. Keywords agrobacteriumtumefaciens曰plant曰transformation 1 根癌农杆菌介导的基因转化原理 3.2 农杆菌菌株的选择与质粒的构建 野生型根癌农杆菌是一种土壤病原细菌袁它通过根部 超毒力的农杆菌菌株和超毒双元载体袁能够增强农杆 伤口侵入植物体袁刺激寄主在侵染部位形成冠瘿瘤袁引发根 菌的侵染能力和T-DNA的整合能力袁较好地克服农杆菌 癌病遥该病在世界范围内普遍发生袁患病植株株体衰弱袁严 对单子叶植物敏感性差的问题遥 重时整株死亡袁在生产上危害极大遥冠瘿瘤的形成是根癌农 3.3 vir基因活化物的使用 杆菌染色体外的遗传物质 Ti 质粒上的一段DNA渊T-D 单子叶植物特别是禾本科植物受伤后分泌的诱导物质 NA冤转移到植物细胞袁整合到染色体组并进行表达的结果遥 不足以形成有效的的信号袁诱导农杆菌vir基因的表达遥在 这种具有天然转基因功能的质粒袁改造后袁在基因工程中可 共培养的培养基中袁添加一定量的酚类化合物袁能够取得良 以用作基因转移的载体遥根癌农杆菌中诱导植物产生肿 好的效果遥 瘤的质粒袁简称Ti质粒遥野生型根癌农杆菌的Ti质粒含有 4 根癌农杆菌转化应用范围与方法的拓展 2个与致瘤有关的区域院一个是T-DNA区袁含有致瘤基因曰 4.1 单子叶植物的转化 另一个是毒性区袁在T-DNA的切割尧转移尧整合过程起作 最早成功的转化是Bytebier等人用含有nos-nptI基因 用袁用于植物基因转化的农杆菌 Ti 质粒中致瘤基因删 的重组Ti质粒感染石刁柏愈伤组织袁并且获得抗卡那霉素 除袁并在 T-DNA 区域插入适当的选择标记和多克隆 的再生植株遥 位点遥 4.2 真菌的转化 2 根癌农杆菌介导的基因转化的特点 Bundock等人成功转化了酵母尧木霉尧曲霉尧镰孢霉尧刺 2.1 导入基因拷贝数低袁表达效果好 盘孢霉尧脉孢霉以及伞菌等多种丝状亚菌遥真菌的成功转化 农杆菌介导的转化向植物细胞导入的外源基因拷贝数 寻找到一种新的真菌基因工程改造方法袁可作为研究宿主 大多只有1~3个袁而其他方法往往会有几十个袁大量拷贝会 与T-DNA转化互作关系的较好的分子体系遥 导致转基因的沉默遥 4.3 裸子植物的转化 2.2 转化频率高