咔唑基花菁类双光子荧光探针及其在海拉活细胞成像中应用.pdfVIP

中国感光学会第八届五次理事会暨2013 年学术年会论文摘要集 咔唑基花菁类双光子荧光探针及其在海拉 活细胞成像中的应用 1 1 ,1,2 郑美玲 ，赵震声 ，段宣明 （1. 中国科学院理化技术研究所，北京 100190） （2. 中国科学院重庆绿色智能技术研究院，重庆 401122 ） 摘 要：一系列具有不同分子结构的花菁类小分子荧光探针被设计合成并应用到荧光显微成像中，通过系 统研究发现，具有不同维度(Cv 或C2v 对称)和疏水基团碳链长度的花菁类分子对线粒体、细胞核等细胞器 表现出良好的标记选择性，探针分子与细胞器结合后荧光强度显著增强。进一步结合显微技术原理与光学 技术，利用自主设计并搭建的双光子荧光显微镜和二次谐波显微镜等激光显微成像系统，研究了该类小分 子荧光探针在海拉活细胞中对线粒体和细胞核等细胞器特异性标记的动态过程、二次谐波信号的极化响应 特性，并成功地构建了活细胞三维光学切面图像。 关键词：荧光探针；成像；活细胞；非线性光学显微 1 引言 荧光显微成像技术已成为活体组织与细胞的微观结构与形态可视化研究必不可少的重 要手段，在肿瘤诊断和医疗检测等领域得到了广泛应用。小分子荧光探针对活体组织与细胞 [1,2] 的特异性标记发挥着十分重要的作用 。目前，采用特异性小分子荧光探针进行细胞微结 构标记成像已经成为活细胞标记和成像技术研究的热点之一，而特异性小分子荧光探针与细 胞中生物大分子之间的相互作用分子机制是其中最具有挑战性的研究方向，深入开展小分子 荧光探针在细胞中特异性标记及其分子机制的研究工作，对生物光子学、生物医学显微成像、 细胞生物学及分子生物学等领域的发展具有十分重要的意义。 2 花菁类双光子荧光探针及活细胞成像 我们设计合成了一系列咔唑基花菁类荧光探针，探针分子的化学结构式如图1 所示，并 对其光学特性，如紫外可见吸收光谱、荧光光谱、荧光量子产率、双光子吸收截面等进行了 充分评价。这类探针分子具有不同的维度（Cv 或C2v 对称）和不同长度的疏水链，从而对细 胞微结构表现出不同的亲和性。这类分子具有大的斯托克位移，一般100 nm 以上。与商业 的双光子荧光探针相比，该类荧光探针具有更大的双光子吸收截面和低毒性，双边探针分子 在800 nm 处的双光子吸收截面高达 1737 GM。大的双光子吸收截面对非线性光学显微成像 将会非常有利。  E-mail: xmduan@mail.ipc.ac.cn 国家自然科学基金(No.资助项目. 62 中国感光学会第八届五次理事会暨2013 年学术年会论文摘要集 图1 咔唑基花菁类荧光探针分子的分子式 我们将其应用到活的海拉细胞标记中，发现其具有染色选择性，一旦与细胞微结构结合 后荧光强度显著增强，且随着染色时间的延长不断增强。进一步利用动力学过程进行跟踪， 可以看到探针分子在不同的染色时间进入不同的细胞微微结构。如图2 的染色动力学过程所 示，单边探针快速的穿越细胞膜，直接染色线粒体；双边探针分子开始在细胞膜上停留，一 段时间后染色细胞核。 图2 1a 和2b 探针分子在海拉活细胞中的染色动力学过程 3 非线性光学显微成像 基于显微技术原理与光学技术，利用自主设计并搭建的双光子荧光显微镜和二次谐波显 微镜等非线性光学显微成像系统，研究了该类小分子荧光探针在海拉活细胞中对线粒体和细 胞核等细胞器特异性标记的动态过程、二次谐波信号的极化响应特性。结合双光子荧光显微 镜的三维分辨功能，实现了对海拉活细胞的三维切面扫描，经重建获得了三维图像。可以清 楚地看到细胞被标记的部位和荧光亮度（图3 ）。 进一步，对花菁类小分子荧光探针的超瑞利散射的特性进行了充分研究，利用双光子荧 光显微成像技术观察到了该系列探针分子的标记选择性，利用