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ISSN 1007-7626 200312
CN 11-3870PQ Chinese Journal of Biochemistry and olecular Biology 19(6):709~ 714
D1PCDK4
1) 1) 1) 1) 2) 1) *
王鸿鹤 , 朱孝峰 , 谢冰芬 , 冯公侃 , 沈竞康 , 刘宗潮
1) 2)
( 中山大学肿瘤防治中心, 广州 510060; 中国科学院上海药物研究所, 上海 200031)
通过生物工程获得人重组 胞周期蛋白(cyclin D1) 及 胞周期蛋白激酶CDK4蛋白, 作为抗
癌药物筛选的分子靶点. 从人HL-60 胞中获得 胞周期蛋白 D1PCDK4 基因的cDNA, 先克隆至
pGE T-Easy载体上, 再经重组构建供体质粒pFastBac-D1和pFastBac-CDK4. 重组供体质粒转化感
受态DH10Bac 胞,挑取确证为白色克隆的菌落振荡培养,分离制备高纯度杆粒DNA. 以重组病毒
适量感染昆虫 胞Tn-5B1-4,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫 胞Tn-5B1-4(Hi5) 中表达
相应的重组蛋白.应用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)在昆虫 胞Tn-5B1-4 中分别高效表达了
人 胞周期蛋白D1和CDK4蛋白.SDS分析表明,表达量占 胞可溶性蛋白质的20% 左右,
表达产物经Ni2+-NTA 亲和层析纯化后纯度达85%以上. 研究表明, 昆虫 胞表达的 胞周期蛋
白D1和CDK4 蛋白能促进Rb 蛋白的磷酸化,具有生物活性.成功构建了 胞周期蛋白D1及CDK4
真核杆状病毒表达载体, 并且在昆虫 胞中正确表达了具有生物活性的 胞周期蛋白 D1及CDK4
融合蛋白.
胞周期蛋白D1,CDK4, 昆虫杆状病毒表达系统,分子靶点
Q786, Q51
Expression and Activity Identification of Human Cyclin D1 and
CDK4 Gene in Insect Expression System
1) 1) 1) 1) 2) 1) *
WANG Hong-he , ZHU Xiao-feng , XIE Bing-fen , FENG Gong-kan , SHEN Jing-kang , LIU Zong-chao
1)
( Cancer Center, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510060, China;
2) Shanghai Institute of Materia Medica, ChineseAcademy of Sciences, Shanghai 200031, China)
Abstract Cyclin D1and CDK4 fusion-protein
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