冷皂化-高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体.pdfVIP

第43卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第 3期 2015年 3月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 404～408 一一～报研一一～ DOI：10．11895／j．issn140931 冷皂化．高效液相色谱法测定乳制品中 叶黄素的5种顺反式异构体 陈万勤 刘 柱 郑国钢 茅佩卿 朱炳祺 丁宇琦 周赛静 (浙江省食品药品检验研究院，杭州310040) 摘 要 建立了冷皂化一高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体。将乳制品进行冷皂化处 理后，经正己烷一石油醚．二氯 甲烷 (2：2：1，V／V)提取 ，使用YMCC30色谱柱分离，以甲醇和 甲基叔丁基醚为 流动相进行梯度洗脱 ，采用二极管阵列检测器于445nm波长下检测，外标法定量 ：在0．127～5．082mg／L 范围内的线性关系良好，相关系数 ( )为0．9999，回收率在96．7％ ～102．2％之间，RSD在4．1％～5．4％之 间(n=6)，检出限为0．010 g／g(S／N=3)，定量限为0．030 g／g(S／N=10)。本方法简单、准确、灵敏度高， 适用于乳制品中叶黄素 5种异构体的检测。 关键词 高效液相色谱法；叶黄素；异构体；乳制品 1 引 言 叶黄素 (Lutein)，又名黄体素，是存在于蔬菜、花卉、水果与某些藻类生物中的天然类胡萝 卜素。 叶黄素具有 良好的预防人体衰老、动脉硬化 】]、抗氧化、抗癌功效 [2]以及独特的护眼功能 ]等，在保 健品、化妆品和动禽类饲料等多个领域广泛应用。美国FDA于 1995年批准了叶黄素作为食品补充剂 用于食品中，我国2007年批准了叶黄素作为营养强化剂添加到婴幼儿或儿童配方食品中5]。叶黄素 分子结构中含多个共轭碳碳双键结构，由于烯键的存在 ，叶黄素可 以存在多种几何异构体 。叶黄素不 同异构体在生物体内的生物活性也不同，其中全反式构象的生物活性较顺式构象要高很多_6]。目前 市售的食品中很少有区分叶黄素不同异构体的含量。因此，建立高效的叶黄素顺反异构体的检测方法 具有重要的意义。 目前叶黄素的检测方法主要以高效液相色谱法_8叫和液质联用法 [J。’]为主。由于叶黄素在光和 热的作用下容易发生顺反异构化 1【3,14]，因此样品的所有处理过程需在较低温度和避光条件下进行，避 免全反式叶黄素发生异构化。所以到 目前为止，国际市场上也只有全反式叶黄素标准物质在售 ，尚未 有叶黄素顺式异构体的标准物质，对顺式异构体进行定量仍然是一个难题 。本研究采用全反式叶黄素 作为标准物质，对5种叶黄素异构体进行定量分析，并且对样品的前处理方法进行了研究，采用冷皂 化法进行样品的前处理，避免叶黄素在高温皂化时叶黄素发生异构化，采用液相色谱法结合YMCC30 色谱柱对叶黄素异构体进行有效分离，准确定量 。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 Agilent1260高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器(美 国Agilent公司)；紫外／可见分光光度计 ； 乙腈、甲醇 (色谱纯，Merk公司)；甲基叔丁基醚、石油醚、二氯甲烷、正己烷、乙醇、四氢呋喃(色谱纯， Tedia公司)；2，6．二叔丁基对甲苯酚 (BHT，纯度99．4％，Sigma-Aldrich公司)；KOH(纯度80％，s maAldrich公司)；实验用水为Milli—Q超纯水。全反式叶黄素标准品(纯度99．8％，ChromaDex公司)。 2014—10-20收稿 ；2014．12．17接受 Em·ail：zgg0617@ 126．tom 第3期 陈万勤等：冷皂化一高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体 405 2．2 全反式叶黄素标准溶液的配制 准确称取5．0mg全反式叶黄素标准品于 100．0mL容量瓶中．用含0．003％ BHT的乙醇溶解并定 容。该溶液可在_4OqC下完好保存6个月。准确吸取叶黄素标准储备液用含0．003％BHT乙醇配制成 标准系列溶液 I，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ和V。采用分光