粒细胞集落刺激因子防治小鼠CCL4所致肝损伤的作用.pdfVIP

所以，本研究成功建立了与NASH比拟性良好、病变过程与临床NASH发病过程相似、符合代谢综 合征范畴的NASH大鼠实验动物模型，为NASH发病机制的阐明提供了实验平台。 40．粒细胞集落刺激因子防治小鼠CCL4所致肝损伤的作用 王君平1 孙殿兴1 李兵顺2 李敏然1 郭争荣1亢继文1 李伟勇3 1石家庄白求恩国际和平医院肝病科石家庄050082 2石家庄市传染病医院四科石家庄050021 3石家庄白求恩国际和平医院传染科石家庄050082 重型肝炎、肝硬化在我国是常见病，但由于其病情危重，而目前又缺乏有效的药物治疗，最终的解决 需要做肝移植，但由于肝移植来源因难，免疫排拆反应及经费高，在众多的患者中也只有少数人得以治疗， 所以目前病死率仍很高。我们设计由CCl4诱导小鼠肝损伤，通过血清学、肝组织病理等指标变化及异性干 细胞移殖原位杂交实验来分析干细胞动员剂一重组人粒细胞集落刺激因子(rhG．CSF)对肝损伤修复的作 用及机制。 1材料和方法 由华北制药金坦生物技术股份有限公司赠；ccl4(北京化工厂生产)；橄榄油(欧蕾特纯冷榨橄榄油)；考 马期亮兰蛋白、丙二醛、超氧化物歧化酶测定试剂盒(南京建成生物公司)，大鼠抗小鼠CD34抗体、兔 抗小鼠Thy．1抗体(Santa 司)，Ficoll细胞分离液、小鼠Y染色体荧光探针染色试剂盒(天津灏洋生物制品公司)。 1．2方法慢性肝损伤实验：400ml／LCCl4 2ml／kg，ip，每周2次，持续70d制备动物模型，模型模型备 成功后随机分为治疗组和对照组，治疗组每天给予rhG．CSF 200ug／kg，SC，连续7d，对照组应用等量生理盐 剂量的生理盐水。亚急性肝损伤实验：随机分为预防组与模型组，各15只，预防组在应用CCh肝损伤前先 每天应用rhG．CSF CCl4 200ug／kg，8C，连续7d，以后400ml／L 每周3次(星期二、三、四)sc，共4wk，然后处死所有小鼠。正常对照组10只。 每次3只，然后处死雄性小鼠并取外周血，分离单个核细胞，每周2次(星期二、五)，经尾静脉注射给 经400ml／L CCl4 CCh2ml／kg每周2次(星期一、四)肝损伤的雌性小鼠10只。上述雌性小鼠应用400ml／L 每周2次共3wk、接受雄性小鼠外周血单个核细胞尾静脉注射也是每周2次共3wk。另外2只雌性小鼠 为对照，400ml／LCCl4应用剂量、次数同上述10只雌性小鼠，但尾静脉注射同剂量的生理盐水。自最后一 次移植30d后处死雌性小鼠。 1．2．2观察指标小鼠血肝功能由白求恩国际和平医院检验科自动生化分析仪检测。肝组织病理标本用 析均按有关试剂盒说明或常规方法进行。Thy．1免疫组化结果分析：每张片子随机观察5个高倍视野，每 个视野计100个细胞中的阳性细胞数，取均值，以百分数表示。 表示，两样本均数的比较采用t检验，等级资料、非参数检验采用秩和检验，生存率或死亡率的比较采用 对数秩和检验，P0．05，则为差异有显著性。 158 2结粜 2．1 52JI，北I’I2 rhG．CSF“!防组25jl，死■Ijl，北一}·为4％，模州自lJ{，北一#为23％，州纰 745±5．2XS2858±28u／L 的牛仃术仃址著件芹片(P005．I-4I)。!阢nl’o横1”m…功fib：41l比ALTfI P0 8±48li34734-8．4U／L．P‘0 B，TBIL两fttkJ|比七廿蚌 05)以艘AST(207 05)均铂址ff十tc*”，㈦AL