脉动膜式张应力环境下血管平滑肌细胞的生长、增殖及其重建.pdfVIP

第七届全国生物力学学术会议论文(摘要) 陕西西安 脉动膜式张应力环境下血管平滑肌细胞的生长、增殖及重建8 何辉1，樊瑜波1，邹远文1，宋锦鳞1，陈道运2，蒋文涛1，郭欣1 1．四川大学生物力学工程实验室，成都610065； 2．第二军医大学人体解剖学教研室生物医学工程研究所，上海200433 SmoothMuscle 心血管系统中，由于心脏有节律的收缩和舒张引起动脉管壁周期性运动，血管平滑肌细胞(Vascular Cells)受到脉动式交变张应力作用。长期以来，人们认识到张应力／应变对细胞的生长、增殖及重建起着重要的作用。 本文利用自行研制的脉动膜式张应力施加装置，对成年雄性sD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞加载，研究弹性基底膜 周期性应变对血管平滑肌细胞生长与增殖的影响，并初步探讨细胞骨架重建过程中的力学响应机制。 原理与方法将体外培养的血管平滑肌细胞种植在弹性基底膜上，通过基底膜密闭以隔开细胞培养小室与液压 小室，采用脉动液压加载方式，使培养膜发生弹性变形，产生周期性应变，从而使膜上的细胞受到相应的张应力作用。 实验系统具备稳定的液压驱动源(图1)，能提供0．5—2Hz的脉动 液压，基底平均拉伸应变可实现0～16％范围加载，符合多种实验研究 的需要。本实验分为三组：A实验组，基底加载应变为0—6％，加载时 间为4h，8h，12h，加载频率为1Hz；B实验组，基底加载应变为0— 14％，加载时间为4}l，8h，12h，加载频率为1Hz；C对照组，与实验组取 自同源、同代细胞，接种培养时间和密度均相同。加载结束后，利用显 微、摄像及计算机图像处理系统，对细胞的生长及其形态变化进行观 图1 实验系统工作原理示图 测与分析；通过对实验各组进行放射性同位素标记(Radiolabeling)及d 一actin免疫组化染色实验，了解张应力／应变对细胞增殖及细胞骨架重排的影响。 结果与讨论脉动膜式张应力环境下，A、B实验组各时间段细胞成活率均80％，细胞脱落10％，表明细胞成 活率大致不受加载应变的影响；对照组细胞长轴取向大体呈无序状态，实验组离开膜中心区域的细胞大致沿环向生 长，这可能与应变作用下离开膜中心区域的周向应变较大有关；放射性同位素标记实验显示，与对照组相比，从加载4h 到12h实验组细胞蛋白质合成总量增加，表现细胞对力学环境适应性反应；Q—actin免疫组化染色实验表明，随加载时 间延长，B实验组(超生理环境)血管平滑肌细胞d—actin含量明显增多，细胞表型转化发育较快，细胞骨架发生重排， 增殖活动逐渐受到抑制。 。 国家自然科学基金资助NO教育部跨世纪优秀人才计划、四川省杰出青年科技基金资助 内皮细胞力学实验图象定量分析系统8 李晓宁，樊瑜波 四川大学生物力学工程实验室，成都610065 体外培养的内皮细胞在剪切力环境中会由起始的无规则多边形逐渐沿剪切力方向伸长，最后表现为梭形，细胞长 轴与剪切力方向一致。细胞的方向性改变和伸长是它对剪切力的一种适应性改变，这种改变被认为可以减轻细胞的 机械荷载，从而保护细胞自身免受剪切力引起的损伤。定量研究力一细胞生长的关系，需要一些力学形态学的指标来 刻画细胞在机械力刺激下的形状变化。为了定量分析内皮细胞在剪切力作用下的形态学变化，测量我们提出的一些 力学形态学指标，我们开发了一套计算机图象定量分析系统。 定量分析系统的硬件由倒置相差显微镜、显微数字摄象机数字CCD、录象机、监视器组成。其中倒置相差显微镜 我们选用日本Olympus 统是一个集成化的软件包，实现了图象采集、图象文件管理、图象处理和测量功能。图象采集支持单帧、多帧、视频图 象采集，图象文件名自动已捕获时间命名；图象文件管理支持图象转换、装载和显示、打印功能；图象处理集成了常用 的一些图象增强、图象分割算法，针对不同的问题，可以选用适当的图象处理算法或算法组合；支持图象的显微标定， 可以测量细胞的常用形态学参数和我们提出的力学形态学参数。 在图象定量分析系统中，细胞图象分割是一个关键