黄花苜蓿双向电泳体系的建立.pdfVIP

维普资讯 第 3O卷 第 5期 中 国 草 地 学 报 2008年 9月 Vo1．30 No．5 ChineseJournalofGrassland Sept．2008 文章编号 ：1673—5021(2008)05—0042—05 黄花苜蓿双向电泳体系的建立 王 楠 ，康俊梅 ，杨青川 ，熊军波 ，金后聪。 (I．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 ，北京 100094； 2．内蒙古农业大学农学院，内蒙古 呼和浩特 010019) 摘要 ：通过对传统的双向电泳技术进行改进和优化 ，建立适合分析黄花苜蓿蛋 白组学研究的双 向电泳体系。结 果表明，使用改进方法后所获得的双向电泳图谱稳定性和重复性较好 ，分辨率较高，经银染后可分辨 出400多个蛋 白点，其等电点主要分布于 pI5～7，分子量主要分布于 1O～150kDa；经考马斯亮蓝染色后可分辨 出800多个蛋 白 点，其等 电点主要分布于 pI5～7，分子量主要分布于 1O～150kDa。 关键词 ：黄花苜蓿 ；蛋 白质组 ；双向电泳 中图分类号 ：$541 文献标识码 ：A 黄花苜蓿 (MedicagofalcataL．)是一种豆科 古海拉尔 ，采集时间为 2005年。所需主要试剂有固 苜蓿属多年生草本植物 ，由于其适应能力强，具有较 相 pH 梯度于胶条 (Immobilinedrystrip，pH4～7， 强的抗寒 、抗旱、耐盐碱、耐瘠薄、抗 病虫害 的特点， 24cm)、固相 pH梯 度缓 冲液 (IPG buffer)、IPG覆 适宜于在干旱 、寒冷的地方推广 。目前，国内外对黄 盖油(Immobilinedrystripcoverfluid)、2Dclean— 花苜蓿的研究多集中于野生黄花苜蓿的驯化与种子 up试剂盒 、2D—Quant试 剂盒、尿素、甘氨酸 、 生产、种子特性 、遗传多样性 、引种栽培 、育种、组织 CHAPS、二硫苏糖醇 (DTT)、碘 乙酰胺、丙烯酰胺、 培养等方面 ]，而对于其蛋 白质组学 的研究报道 甲又 双 丙 烯 酰 胺、过硫 酸 铵、四 甲基 乙二 胺 较少。随着功能基 因组学的兴起 ，蛋 白质组学技术 (TEMED)等，均购 自Amersham公司。其余试剂 方法在植物抗逆性研究中的应用 日益广泛和深入。 为国产分析纯产品。 1975年，OFarrell建立了将蛋白质的等电点及相对 1．2 方法 分子量两种不 同特性结合起来进行蛋白质分离的技 1．2．1 幼苗的培养 术——双向电泳。双向电泳作为蛋 白组学研究中的 种子用蒸馏水洗涤，并浸种 12h，播种于盛有石 核心技术之一 ，是对蛋 白质组分辨率最高、重复性 英砂的塑料容器中，人工气候箱 中培养 ，温度 25℃， 最好的分离技术 ，也是 目前常用的唯一一种能够连 相对湿度6O ～8O ，每 日光照 16h，同时浇灌适量 续在一块胶上分离数千种蛋白质的方法，广泛应用 Hoagland营养液，保持石英砂中适宜水分，两周后 于生物学研究 的各个方面 ]。双向电泳技术早期主 取样 。 要应用于细菌、动物组织和细胞全蛋 白质组分 的分 1．2．2 总蛋 白的制备 析，近年来在植物中的应用亦有不少报道 ，但大多集 总蛋白提取采用三氯乙酸／丙酮沉淀法_l5]。取 中于水稻、小麦等模式植物或其它一些草本植物上 ， 黄花苜蓿幼苗全株 0．5g，液氮研磨成粉状 ，加入 10 在黄花苜蓿中的应用报道较少。本实验探索了黄花