实时荧光PCR检测旋毛虫方法的建立与初步应用.pdfVIP

实时荧光PCR检测旋毛虫方法的建立与初步应用 袁金钱，张子群，路义鑫，韩彩霞，宋铭忻 (东北农业大学动物医学学院啥尔滨150030黑龙江出入境检验检疫局哈尔滨150030) 光信号，对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等DNA检测，不出现非特异性荧光信号；最小检出量 x 为1．32 人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠肌肉可在攻虫14d后100％检出，对送检狗肉样品可从压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条 检测结果为阴性的63个狗肉样本中敏感地检出8个阳性。 【关键词】检测；旋毛虫；实时荧光PCR 旋毛虫病(Trichinosis)是一种重要的人兽共患寄可以快速以及动态地检钡IJPCR扩增产物并减少外来核 生虫病，主要因生食或半生食含有旋毛虫幼虫囊包的 酸造成的污染，整个PCR过程可实现自动化，且耗时 猪肉或其他动物肉类而感染。由于其宿主特异性极差 短，操作方便。具有比普通PCR更高的灵敏性，而且 和病原传播途径的多样性，几乎所有哺乳动物均可感 还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性。 染。无论是肉食、杂食动物还是虫食、草食动物都可 目前已应用于多种病原微生物的检测，如禽流感、人 以感染，甚至某些鸟类也可感染，人也是旋毛虫的易 类疱疹病毒、乳酸杆菌、乙型肝炎病毒、鸡马立克氏 感宿主之一。截止到目前为止，至少已报道150多种 病等的诊断，在寄生虫学领域已应用于对华枝睾吸虫、 哺乳动物可以感染旋毛虫，常见的有人、猪、鼠、犬、 恙虫病东方体、松材线虫、鳞球茎茎线虫、弓形虫等 熊、狐、狼、貂等。迄今。除澳大利亚及某些岛屿外， 的诊断研究。．目前，国内外均未见实时荧光PCR方法 其分布几乎遍及全球各地，已成为一种全球性自然疫 检测旋毛虫的报道。 源性疾病。该病对人类的健康危险很大，而且还给畜 本研究根据各旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基 牧业及食品工业带来重大的经济损失，是进出口检验 MGB探针，建立了实时荧光 因设计引物和TaqMan 检疫中的二类动物疫病。 PCR同时检测各旋毛虫隔离种的方法，具有敏感性 旋毛虫的检测方法主要有压片镜检、人工胃液 强、稳定性好、通量高等特点，为旋毛虫的检验检 消化法、凝集试验、酶联免疫吸附试验、胶体金免 疫以及以后制作试剂盒提供良好的实用技术和研究 疫层析等。其中压片镜检和人工胃液消化法的敏感 基础。 性较低，分别是每克肌幼虫数(LPG)为3和l时 1材料和方法 方能检出，漏检率极高；血清学检测技术的敏感性 较传统方法有很大的提高，如ELISA可达O．01LPG。1．1样品来源 但不同程度地存在假阳性和交叉反应，且不能对所 试验用各旋毛虫隔离种均为东北农业大学动物医 有旋毛虫隔离种进行同时检测。因此研制敏感性高、 学学院寄生虫学教研室传代保存，分别为旋毛形线虫 特异性强的通用型旋毛虫检疫技术，对保障人民饮 (TdehlneLla 食安全和提高我国肉类产品质量及安全性具有重要 的现实意义。 虫黑龙江隔离种(HH)以及猪旋毛虫隔离种美国株 实时荧光PCR技术不仅实现TPCR从定性到定量 SUUm)、猪鞭虫(TriehudssMs)、 (MP)。猪蛔虫(Ascads 的飞跃，而且采用了完全闭管检测，不需PCR后处理， 猪钩虫(S．4ne cnnis)