04级基础医学 刘雅涵 刘萌萌 毛婧倬 顾名夏 郑佳佳.docVIP

04级基础医学 刘雅涵 刘萌萌 毛婧倬 顾名夏 郑佳佳 综述： L型钙离子通道——Ryanodine受体耦连障碍与心衰 摘要：在心力衰竭中，钙诱导的钙释放过程(CICR)出现障碍。在最近研究中发现，CICR过程中LCC-RyR分子间耦联失效是心衰过程中的重要环节，此篇综述也对导致LCC-RyR耦联障碍的因素进行了报道。 正文： 心衰是威胁人类生命的重大疾病之一，病人最终因心肌收缩能力不足而死亡。在心肌负荷过重的情况下，心肌会首先代偿性肥大以维持充足的心输出量和组织灌流.当心肌失代偿时,就会最终导致心衰。所以,为了阻止心衰的发生，一个有效的策略就是及时阻止或延迟心肌肥大由代偿向失代偿的转变.因而了解心肌肥大的分子机制对于临床治疗心衰显得尤为重要。 王世强教授和张幼怡教授的协作组为了探索这一演变的分子机制，对控制心肌兴奋收缩耦联的钙信号转导过程进行了细胞和亚细胞水平的功能鉴定，并从分子间相互作用的角度系统研究了细胞膜钙离子通道与肌质网Ryanodine 受体相互耦联的分子动力学过程，首次发现两分子的耦联效率在心肌肥厚发生早期、细胞收缩功能尚无变化的时候就已经发生了衰退。衰退的原因是锚定两分子所在膜结构的蛋白分子junctophilin的表达量下降。Junctophilin的减少使细胞膜钙离子通道与肌质网Ryanodine 受体间耦联效率进行性地衰退，最终导致细胞整体钙信号下降和心肌收缩能力的降低。这一研究为心衰病理发生提供了重要的线索。 为了阐明心肌肥大过程中LCC-RyR耦联的一些分子内的改变，该研究复制了动脉狭窄引发的代偿性和失代偿性心肌肥大的大鼠模型。在动脉结扎的7-11周后。血流动力学分析和超声心动图通过左心室厚度的增加和正常心肌收缩指数来鉴定代偿性心肌肥大的水平,通过增加的左心室厚度和收缩指数轻度减少的起始点来鉴定失代偿性心肌肥大的水平。(ig.1A,1B,1C)他们使用全细胞膜片钳技术和激光共聚焦显微镜成像技术来记录在细胞去极化至0V时的LCC钙离子流和细胞水平的钙瞬变(ig.1D)。结果显示,在心肌肥大的失代偿期,钙瞬变的幅度和细胞的收缩力均明显下降,细胞的兴奋收缩耦联跟正常水平相比有所降低(ig.1F,1G)在心肌肥大的代偿期，钙瞬变的幅度和兴奋收缩耦联均无改变.这些结果说明:与心肌肥大相关的细胞兴奋收缩耦联缺陷仅发生在心肌肥大的失代偿期，而非代偿期。 ig.1 在心肌肥大过程中LLC-RyR耦联的改变 为了研究在心肌肥大的不同时期LCCs-RyRs分子内耦联的改变,该研究组使用了松弛膜片钳共聚焦显微镜成像技术同时显现LCC引发的钙离子流(钙小星)和RyR引发的钙火花. 当心肌细胞兴奋时，细胞膜上电压依赖性L型钙通道被激活，其产生的钙内流，即钙小星，激活了Ryanodine受体产生钙火花，而大量钙火花总和产生了钙瞬变，从而启动心肌细胞收缩过程。当细胞膜去极化的时候,共聚焦线性扫描成像检测到两种截然不同的钙信号(ig.2A): Fig.2A 其中陡峭的，幅值大的峰为RyR产生的钙火花；平缓的，幅值小的为LCC产生的钙小星。 在实验中，该研究组采用这种方法比较了对照，代偿，失代偿三个过程LCC-RyR耦联的差异从而考察分子内损伤是发生在心肌肥大的哪个时期。结果显示，在正常心肌细胞中，一个钙小星可引发一个钙火花；在代偿心肌肥大细胞中，有部分钙小星无法成功的引发钙火花；在失代偿的心肌肥大细胞中，存在更多的钙小星无法引起钙火花的现象。 为了研究LCC-RyR耦联中的哪一个步骤在心肌肥大的过程中发生了改变，该研究组通过进一步的实验发现：钙火花的幅值和到达峰值的时间在心肌肥大的各个时期均无显著差异（fig2B,2C），这表明钙火花形成过程本身在心肌肥大的过程中并没有发生变化。 Fig2B,2C 另外，该实验组通过“hit指数”来衡量钙小星引发钙火花的概率。(fig.2D,2E) fig.2D,2E Hit指数从正常期到代偿期再到失代偿期显示出明显的衰退。同时miss指数呈现相反的增加趋势。Hit指数的变化和miss指数的变化表明LCC-RyR分子内的耦联效率降低不仅仅发生在失代偿期，也发生在代偿期。 为了进一步量化心肌肥大时的分子内产生的变化，该实验组又进行了LCC-RyR耦联的动力学测量。（fig.3A,3B,3C） fig.3A,3B,3C 结果显示，虽然心衰细胞的L型钙通道活动没有明显异常，但其L型钙通道触发产生的钙瞬变幅度显著下降，时程显著延长。研究组对单个耦联位点进行的测定表明，L型钙通道触发Ryanodine受体产生钙火花的潜伏期显著延长。由于L型钙通道开放时间有限，潜伏期延长就意味着两分子间耦联概率下降，其中触发失败的耦联单位仍可为后继的L型钙通道开放所触发，从而产生钙释放的去同步化。 因此，延迟的耦联