A-NK%2fIL-2抗肿瘤作用的基础的研究.pdfVIP

of 0f Collection Selected Heiloegjiaagh洳SocietyhIml咖10thAnniv∞a．,y(1993—2003)A Papem A．NK／IL一2抗肿瘤作用的基础研究 王志华1，张彦1，吴长有2，张春艳1，李波’ (I．哈尔滨医科大学肿瘤研究所，哈尔美国国立健康研究所) 测定细胞体外杀伤肿瘤细胞的括性。通过做扫描和透射电镜．对A-ffK细胞杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察。结 果不同培养条件下的A-NK细胞均可在短期内大量扩增(p0．0S)，且均有很强的杀伤肿瘤的活性(P0．岱)。被 为A-NK细胞的进一步研究和l陆床应用推广莫定了理论基础。 【关键词】A-m≈AIMV；IL-12；M1T naturalkillBr A-NK(adhelEntceu)基于其体外增核细胞，充分洗涤后，置于塑料离心管中用PME 殖和抗肿瘤能力强，对正常细胞无杀伤作用等优点， (5mmI，L)室温处理40分钟备用。 成为近年来肿瘤过继免疫疗法的研究热点。在临床 1．3 A-NK细胞的诱导 应用中，现在常用于细胞培养的完全培养基，因含有 用PME处理后的人外周血单个核细胞分别置 人AB血清，虽经各种病毒的检测，但仍有可能传播 于以下四组培养液中： 其他疾病，安全性低，并且存在批问差异，不宜质控， A组：AIMV。m-2(6000FU／m1)； 价格也很昂贵。无血清培养基则可达到生物洁净要 求。成分明确，质量稳定，便于质控，克服了添加人 AB血清的缺点，对于免疫治疗的推广应用有重要意 2(6000rg／m1)； 义。Ⅱ，12又称NK细胞刺激因子，能促进NK细胞 的增殖与杀瘤作用。本研究力求找到一种新的方 2(1000I【J，nd)，Ⅱ，12(5n异，m1)；． 法，即不减少A-NK细胞的数量和活性，又能增加其 调整细胞浓度为5×l驴，nll，培养3—5h。移去含 临床应用的安全性。 未粘附塑料表面的细胞悬液，收集粘附于塑料表面 的细胞(即A-NK细胞)，分别重悬于各自含50％自 l材料与方法 体条件培养基的培养液中，调成细胞浓度为1—2× 1．1主要试剂与材料 106／ml。继续培养。2—3天换一次液。 rhIL一2(南京军区军事医学研究所产品)；K,-121．4 A．NK细胞增殖活性的测定 (美国国立健康研究所吴长有博士惠增)；淋巴细胞 采用改迸的四甲基偶氮睦盐(M盯)比色法“1， 分离液(si弹)；苯丙胺酸甲酯(Ph也，Sigma)；Mrr (Sigma)；RPMI一1640培养液(Cibco)；人AB血清(哈 则增殖快。 尔滨红十字中心血站提供，用于人A-NK细胞培1．5 A-NK细胞杀伤活性的测定 养)；胎牛血清(中国医学科学院血液学研究所，用于 肿瘤细胞培养)；无血清培养液(Amv，GaⅪo)。人肺 瘤细胞，效应细胞为ABCD四组A-NK细胞，效靶比 腺癌细胞Amp973和人红白血病细胞K562由本研 例为100：l。设立效应细胞和靶细胞共同孵育孔(E 究所提供。所用塑料培养瓶和培养板均为美国 +T)，效应细胞对照孔(E)和靶细胞对照孔(T)，每 ‰公司产品。酶标仅(BioRAU。450型。美国制