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HL-60细胞早期嗣亡中端粒酵hTEI玎基因表达的变化 185 HL．60细胞早期凋亡中端粒酶hTERT基因表达的变化 阎庆国黄高升张晓辉王哲 端粒是构成真核生物染色体的天然末端。端粒酶是催化增加染色体末端端粒重复序列反 应的核糖核蛋白复合物，其活性在正常体细胞(生殖细胞和造血细胞除外)受到严格的抑制，而 在98％的永生化细胞系和约90％的包括造血组织肿瘤在内的恶性肿瘤细胞中重新活化LlJ。 端粒酶是由RNA和蛋白质两部分组成，其RNA有与端粒互补的模板及3’端粒引物的识别位 点；其蛋白质部分即端粒酶的催化亚基，具有以RNA模板合成端粒DNA的作用，是端粒酶结 年来有关端粒酶的研究虽然已经较为深人，但关于药物诱导细胞凋亡过程中端粒酶催化亚基 材料与方法 1．细胞株急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞株源自中国科学院上海细胞生物研究所 细胞库。 DNA多聚 Sigma公司，M-MLV反转录酶及RPMI．1640购自美国LifeTechnologies公司，Taq 司，p GAG，ITGAAGC汀AGl]_rCGl℃GAT，3’；hTERT上游弓I物：5 7一GGATGAAGCGGA GCAA．3’，下游引物：5 成。 ’ 60细胞在37℃，5％002，10％FCS-1640培养基中常规培养，分成A、B、C3组，分gⅡ加VP-16 至终浓度1Hg／rnl、2肛g／ml、3腭／hd，培养3 x h后各组分别取1 10％FCS-1640后继续培养至6，12，24 106细胞用于梯状DNA检测和An． nexin-V-F1∞s染色o 37℃作用lh，0．1 tag／nil蛋白酶K，50℃3h，上清经酚氯仿抽提后沉淀于异丙醇中，回收的 DNA经2％琼脂糖凝胶电泳检测。 作者兽位：710033西安，第四军医大学病理学教研室 186 中国癌盎研究进展@ PI和1 m mHepes 缓冲液配成染色溶液，在EP管中HL-60细胞与现配的染色溶液37℃孵育10rain，置荧光显 微镜下观察。 1 mmol／LdNTP 20出，包括细胞总RNAgg，5×逆转录反应缓冲液4出，2．5 4阻，oligo(dt)18 2m，M-MLV反转录酶200U，37℃反应l mmol几dNTP 括等量逆转录反应产物4出，争actin及hTERT的寡核苷酸引物5pmol，2．5 45 s；74℃。60s，30个循环。2％琼脂糖电泳检测。 结 果 度和时间点，我们在陈协群等[4]的实验基础上，选择(A)1}tg／ml、(B)2pg／ml、(C)4pg／ml三 个药物浓度和(1)6h、(2)12 h h、(3)24 三个时间，取样检测梯状DNA。如图1 所示，Al～c3各