海洋破囊壶菌Thraustochytrium+sp.FJN-10+DHA生物合成途径相关延长酶的克隆和表达.pdfVIP

辽宁-土噍 奎国海洋生曲娃术与海_萍5格学术套截论文喜 2006．8．2-6 原为蓝紫色结晶物而活细胞几乎无还原MTT的能力，通过分析该结晶物含量可测定活细胞的数量。但 从我们长期的筛选研究中发现，通过MTT法检测具有抗肿瘤活性的苗株中很多并不具备抗稻瘟霉活 性，如果只是从抗稻瘟霉活性菌株中寻找抗肿瘤活性物质．必然存在大量抗肿瘤菌株的漏筛。从稻瘟 霉出发筛选得到的抗肿瘤菌株只是对细胞微管系统有抑制作用，而抗肿瘤的途径多样．直接以MTr 法筛选虽然工作量较大，但仍是最可靠的。 基于16S 不胨化，不产生类黑色素，硝酸盐还原，而s肌PDc口Mgw对牛奶不凝固但迅速胨化，产生类黑色素， delta5．3beta．hydroxysteroid 因而，还有待于DNA．DNA杂交对菌株A01059进行进一步鉴定。 DHA生物合成途径相关延长酶 海洋破囊壶菌Thraustochytriumsp．FIN一10 的克隆与表达 江贤章黄建忠 (福建师范大学生命科学学院，福州，350007) acid，简称DHA)是目前发现的碳链最长．不饱和度最高的m3 摘要：二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic 长链高度不饱和脂肪酸，具有抗·心血管疾病，抗血脂，降血压、预防备种癌症等重要生理功能，是目 前研究的热点．DHA的生物合成途径涉及到脂肪酸碳链的延长反应，催化这一反应的酶是碳链延长 酶．由于碳链延长酶是膜结合蛋白，目前还没有行之有效生化手段对其进行分离纯化进行研究，因此 只能通过基因的克隆，从分子水平对其酶学表征进行研究．本文以海洋真菌Thraustochytriumsp． TNvscl中实现功能的表达． 延长酶TFD6基因全长816 bp(GenBank 量为31．3KDa，等电点为9．26，是个疏水性很强的蛋白，具有5个跨膜区；延长酶TFD5基因奎长 831 KDa，等电点为8．8， ID：DQ299827)，编码276个氯基酸，预测的延长酶分子量为31．9 bp(GenBank 守序列与KKXX内质网结合信号肽． 延长酶跨膜区的主要结构是13-片层结构与无规则卷曲。HXXHH保守序列主要位于无规则卷曲中．聚 类以及进化树分析表明Thraustochytriumsp．FJN．10延长酶与其它物种的延长酶同源·隆}吏低，TFD6与 ThraustochytriumA6延长酶进化距离最近，TFD5与Thraustochytriumsp．A5延长酶进化IE离最近． TFD6，TFD5延长酶酵母表达系统，脂肪酸甲酯的气相色谱 构建了Thraustochytriumsp．FJN．10 功．为基因工程技术生产DHA以及其它高度不饱和脂肪酸奠定基础。 关键词：高度不饱和脂肪酸；二十二碳六烯酸；破囊壶茵；延长酶；克隆与表达 互宁．土t 奎电瘁耳ttl,技术量喀耳焉●学术套馥论文暴 2006^．2-6 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoicacid，简称DHA)是目前发现的碳链最长、不饱和度最高的∞．3 长链高度不饱和脂肪酸(Long-chainpolyunsaturatedfatty 脂、降血压、预防各种癌症等重要生理功能。DHA的生物合成途径涉及到脂肪酸碳链的延}∈反应， 催化这一反应的酶是碳链延长酶。由于碳链延长酶是膜结合蛋白。目前还没有行之有效生化手段对其 进行分离纯化进行研究，因此只能通过基因的克隆．从分子水平对其酶学表征进行研究。本文以海洋 真菌Thraustochytriura 整基因，并在S．eerev缸iaeINVScl中实现功能的表达。 材料与方法 材料与菌种 破囊壶菌Thraustochytrium sp．FIN．10．系本研究小组从海水中分离纯化并保存。