RNA沉默 高温 RNA依赖的RNA聚合酶 病程相关蛋白 瞬时侵染论文.docVIP

RNA沉默论文：高温对抗病毒RNA沉默及转基因RNA沉默的影响 【中文摘要】植物的病毒抗性受到外界环境的影响,高温可以激活植物体对病毒的防御机制,使植物体的病毒症状缓和或完全消失。该现象很早已被发现并在很多文章中阐述,然而其具体的分子机制仍不是十分明确。本研究利用心叶烟和本生烟两种植物材料,探讨了PVX、PVYN病毒诱导的RNA沉默以及瞬时侵染GFP诱导的转基因RNA沉默受温度影响的基本规律和分子机制,以下是具体研究结果。(1)30℃持续处理PVX和PVYN发病植株(热恢复试验)表明,处理后植株上部新生叶片症状逐步减轻,12天后症状完全消失,ELISA检测病毒含量接近健康水平,下部老叶片虽保持发病症状,但病毒含量也持续下降。这说明高温能增强心叶烟抗病毒RNA沉默。植株上部叶片是否表现症状取决于病毒复制扩散与病毒RNA同源降解之间的平衡,22℃条件下,虽然植物体也会发生病毒诱导的RNA沉默,但不足以阻止病毒由发病叶片向新生叶片的扩散,最终导致整株发病;而高温条件下,发病区病毒含量下降,同时由于上部叶片RNA沉默增强,迅速将自下而上扩散的病毒降解,使上部叶片维持无症状态。当症状恢复植株置于22℃条件时,上部叶片会重新发病,这说明RNA沉默与病毒扩散始终处于动态抗衡中。这一研究结果... 【英文摘要】High temperature activates host’s antiviral defense, resulting in developing mild symptoms or a quick recovery from viruses. This thermal activated antiviral defense has been described for many years, but its molecular mechanism has not been completely understood yet. In this study, we demonstrated the basic laws and molecular mechanisms of thermal activated RNA silencing triggered by virus (PVX or PVYN) or by co-infiltrating GFP in Nicotiana glutinosa and Nicotiana bethamiana respectively. The results are ... 【关键词】RNA沉默 高温 RNA依赖的RNA聚合酶 病程相关蛋白 瞬时侵染 【英文关键词】RNA silencing high temperature RNA directed RNA polymerase pathogensis-related protein transient infiltration 【目录】高温对抗病毒RNA沉默及转基因RNA沉默的影响 符号说明 4-7 中文摘要 7-10 Abstract 10-12 1 前言 13-29 1.1 RNA 沉默及其介导的病毒抗性 13-21 1.1.1 RNA 沉默现象的发现 13 1.1.2 RNA 沉默的分子机制 13-15 1.1.3 参与RNA 沉默的细胞组分 15-17 1.1.4 siRNA 介绍 17-18 1.1.5 温度对RNA 沉默的影响 18-19 1.1.6 植物病毒诱导的 RNA 沉默与病毒抗性 19-21 1.2 植物诱导性抗性及PR 参与的水杨酸介导的抗病毒防御 21-27 1.3 水杨酸介导的防御机制与RNA 沉默机制在抗病毒中的交叉对话 27 1.4 本研究的立题依据和主要研究内容 27-29 2 材料与方法 29-46 2.1 实验材料 29-30 2.1.1 植物材料 29 2.1.2 病毒毒源 29 2.1.3 PCR 引物 29-30 2.1.4 菌株、质粒 30 2.2 实验方法 30-46 2.2.1 植物材料管理 30 2.2.2 病毒的提纯及抗血清制备 30-32 2.2.3 病毒的接种及ELISA 检测 32-33 2.2.4 农杆菌瞬时侵染及长波紫外灯观察 33 2.2.5 温度处理及取材方式 33-34 2.2.6 用于mRNA 和小RNA Northern blot 的探针的制备 34-39 2.2.7 mRNA 的Northern blot 39-42 2.2.8 小RNA 的Northern blot 42-46 3 结果与分析 46-64 3.1 病毒的提纯及抗血清制备 46-47 3.1.1 PVX 病毒的提纯 46 3.1.2 PVYN 病毒的提纯 46-47 3.1.3 抗血清制备及效价检测