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生物芯片在垂体腺瘤分子机制研究中的应用 作者 作者单位 干小强 中国人民解放军第二军医大学附属长征医院神经外科， 上海 200003 卢亦成 中国人民解放军第二军医大学附属长征医院神经外科， 上海 200003 丁学华 中国人民解放军第二军医大学附属长征医院神经外科， 上海 200003 1 垂体腺瘤分子机制研究现状 现在大部分基础科研集中于发现导致正常垂体细胞转变的致瘤性分子，主要分布在以下领域：①下丘脑神经垂体分泌调控系统;②细胞因子和信号传导;③细胞周期调控蛋白;④致癌基因。尽管已经明确少数垂体腺瘤如生长激素 (GH) 腺瘤中存在原癌基因活化，但并不普遍存在于各种腺瘤亚型中。同样，已知腺瘤侵袭性转变与数个基因突变、细胞外基质如黏蛋白 (tenascin)、黏附分子如神经细胞黏着分子 (NCAM) 等存在相关性，但在侵袭性腺瘤就同一基因，如p16、p27-kip1，重复检测其表达差异性，却得出相反的结果;而复发腺瘤研究显示其与初发腺瘤的细胞来源不同，暗示垂体腺瘤的起源可能是多克隆发生、优势单克隆起源或某些分子改变导致初发腺瘤中某个休眠细胞单克隆增殖，因此垂体腺瘤相关的分子机制仍不明确。正如Melmed[2]所认为：由于传统科研方法存在诸多缺陷，如缺乏功能性人类垂体细胞株培养，可靠的动物模型有限以及难以复制垂体腺瘤独特的生物学行为等，人类垂体腺瘤的基础研究仍是举步维艰。 2 生物芯片在垂体腺瘤中的应用 越来越多的研究证实：垂体腺瘤的发生、发展是一个多阶段的复杂过程，涉及多个基因、蛋白的相互作用。既往针对单一基因或蛋白进行研究，不仅耗时、费力且难以解释垂体腺瘤发生、发展的各个方面，更不能全面地揭示垂体腺瘤的分子机制。最近在生命科学领域中迅速发展起来的生物芯片技术是融生物工程技术学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术，能将分散在研究中的反应、检测、分析等过程连续化、自动化、集成化、微型化，具有高效、高通量、高信息量等突出优点[3]，可直接对微量的垂体腺瘤组织进行高效、快速、高通量的检测，使在分子水平上全面、综合分析成为可能。最常见的分类方式是按芯片固定的生物分子探针进行，可分为基因芯片、蛋白质芯片和组织芯片。检测的基本原理是依据分子间特异的相互作用结果，如基因芯片是依据核酸的分子杂交原理，组织芯片应用的是根据特异性抗原-抗体反应等。 2.1 垂体腺瘤发生机制的研究进展 明确垂体腺瘤发生、发展的分子机理是彻底攻克垂体腺瘤的关键。然而通常能导致肿瘤发生的致瘤性基因突变却罕见于垂体腺瘤[4]，而且数种腺瘤类型，如GH腺瘤、PRL腺瘤、促甲状腺激素 (TSH) 腺瘤的存在，也表明无单一共同病因造成腺瘤发生[5]。传统的基因工程手段仅孤立地研究某个基因，切断了细胞、基因之间的功能影响与联系，不能准确反映基因的真实功能。相反，利用基因芯片和 (或) 蛋白芯片、组织芯片比较正常垂体与肿瘤组织，确定二者之间在基因转录、蛋白表达、腺瘤亚型上的差异，从而明确众多的基因、蛋白与垂体腺瘤发生的相关性，达到在细胞、组织、器官乃至整个机体水平上了解垂体腺瘤发生的目的。 PRL腺瘤是最常见的垂体腺瘤。实验研究发现靶向性高表达促黄体生成素 (LH) 的转基因鼠 (LHCTP) 可出现一系列内分泌肿瘤，如卵巢肿瘤和乳腺肿瘤等，其中也包括表达转录因子pit-1的垂体细胞高度增殖，并可最终导致PRL腺瘤产生。但该PRL腺瘤具有卵巢依赖性，切除卵巢后能阻止垂体腺瘤的产生。因此，在LHCTP鼠中卵巢可能提供一种长期、慢性的营养性支持，促进正常的垂体细胞转变为腺瘤细胞。为了揭示其深层次的分子机理，Mohammad等[6]应用基因芯片进行基因表达谱的差异性研究，结果显示：编码一天然HMG蛋白转录因子——p8基因，所对应的表达序列标志 (EST) 在肿瘤中表达明显上升，平均上调12.3倍，且仅定位在PRL腺瘤细胞中;而p8基因在正常垂体中功能静止;作者进一步将p8基因表达下降的PRL GH3细胞株以及致瘤性的克隆衍生物注入无胸腺的鼠中，与存在高浓度的p8基因表达的野生型GH3细胞比较，前者减少或根本不能导致肿瘤发生。因此，垂体GH3细胞表型转化、维持需要p8基因表达，且当p8基因重新表达在PRL细胞中，在体内将形成PRL瘤。 同样，近年来认识到在罕见的TSH腺瘤病人中，甲状腺受体β (TR-β) 呈显性负相突变，提示甲状腺受体突变可能与TSH腺瘤发生相关。构建的TR-β突变的基因嵌入鼠，即TR-β(PV/PV)鼠，将自发性出现TSH瘤，且与存在所有甲状腺受体类型均丧失的鼠，即TR-α1(-/-) TR-β(-/-)鼠，表型一致