低盐和高盐环境下α-Synuclein构象的19FNMR研究.pdfVIP

波 谱 学 杂 志 第 32卷第 1期 v01．32 No．1 2015年 03月 ChineseJournalofM agneticResonance Mar．2015 文章编号：1000．4556(2015)01．033—08 doi：10．11938／cjm 低盐和高盐环境下a-Synuclein构象 的 FNMR研究 戴晨晔 ，刘买利 ，李从刚 [1中国科学院生物磁共振分析重点实验室，波谱与原子分子物理国家重点实验室，武汉磁共振中心 (中国科学院 武汉物理与数学研究所)，湖北 武汉 430071； 2．中国科学院大学 ，北京 100049】 摘 要 ：天然无结构的突触核蛋 白a-synuclein(AS)与帕金森病密切相关．最近研究发现低盐 与高盐环境下 AS纤维化的速率不同，所形成的纤维结构，细胞毒性与传染性也不一样， 但盐效应对 AS聚集及纤维结构影响的具体分子机制仍不清楚．该文通过生物标记方法在 AS的酪氨酸芳香环上引入 F标记的探针，利用 F核磁共振 (NMR1方法研究了低盐与高 盐环境下AS的构象差异，发现 FNMR对天然无结构蛋白构象变化非常灵敏，AS在低盐 中的构象比较紧密，而在高盐下比较松散，这种在溶液中起始的构象差异可能是导致最终 AS纤维结构与生物效应不同的原因． 关键词：液体核磁共振(1iquid-stateNMR)； FNMR；天然无结构蛋白；a-synuclein 中图分类号：0482．53 文献标识码 ：A 引言 帕金森病是主要的神经退行性疾病之一，其患者大脑 内会出现特征性标志物，路易 小体(Lewybody)．由140个氨基酸所组成的突触核蛋 白a-synuclein(AS)因大量存在于路 易小体 内而被广泛认为与帕金森病相关 ¨． 收稿日期：2014．05—05；收修改稿 日期：2015一Ol一11 基金项 目：国家自然科学基金资助项 目，国家重点基础研究发展计划(“973计划”)资助项 目(2013CB910200) 作者简介：戴晨晔(1988．1，男，湖北武汉人，硕士研究生，生物工程专业． 通讯联系人：李从刚，电话 ：027 E—mail：conggangli@wipm．ac．cn． 34 波 谱 学 杂 志 第 32卷 AS在溶液中为天然无结构蛋 白，可以分为 3个部分：N端，第 1～6O位氨基酸残 基，包含 4个不完全重复的保守片段(KTKEGV)；NAC区域(NACregion)，中间的第 61 ～ 95位氨基酸残基，这一区域有 3个上述的保守KTKEGV重复片段；C端，第 96～140 位氨基酸残基，富含酸性氨基酸和脯氨酸，带有大量的负电荷 ．N端和NAC区域很容 易形成 ．螺旋(．helix)类型的二级结构，是其与生物膜相互作用的区域；NAC 区域在 AS纤维化的过程中作为疏水中心，对AS的聚集至关重要l2】；酸性的C端则表现了极 强的亲水性，在水溶液、膜环境及纤维中都没有稳定的二级结构． 最近的一项研究发现在低盐和高盐两种环境下AS会聚集形成不同形态的不溶聚合 物．在低盐环境下会形成带状(ribbon)不溶聚合物，其结构 比较松散 ，耐受蛋白酶K 的 时间为 5min；而高盐环境下会形成纤维状(fibril)不溶聚合物，其结构较为紧密，耐受 蛋 白酶K的时间为 30min．这两种不溶聚合物的细胞毒性也有差异，高盐环境下所形 成的纤维状不溶聚合物细胞毒性更强pJ． 有研究者发现盐浓度的不同会影响AS的聚集速率 ．全长AS在高盐环境下的聚集 速率要高于低盐环境下的聚集速率 ．而切除AS的C端或者加入精胺(spermine)之后， 盐浓度的变化对 AS的聚集速率影响不大4【J．同时另一项研究发现 AS及其常见突变体 在溶液