漆酶固定条件的实验研究.pdfVIP

第 18卷 第3期 广 西 工 学 院学 报 2007年 09月 JOURNALOFGUANGXIUNIVERSITYOFTECHNOLOGY V0l1．18 No．3 Sep．2007 文章编号 1004．6410(2007)03．0001．03 漆酶 固定条件的实验研究 周菊英，徐柳苏，古家虹，盘荣俊 (广西工学院信息与计算科学系，广西 柳州 545006) 摘 要：制备了四氨基酞菁铜(cuTAPc)一Fb04纳米复合粒子，以戊二醛作为交联剂，成功地将漆酶固定在CuTAPc — Fb04纳米复合粒子上。探讨了各种因素对固定化漆酶活力的影响。结果表明：当以10％的戊二醛与载体交联 8 h后，再以2mg／mL的漆酶溶液(pH=7)于4℃下固定所得固定化漆酶活力最高。 关 键 词：CuTAPc一 04；固定；固定化漆酶；活性 中图分类号：TP212．2 文献标识码：A 漆酶是一类多酚氧化酶，漆酶底物相当广阔I【J，它能催化许多酚类和芳香胺类化合物。因此在废水处 理、生物漂 白、芳香化合物转化、食品加工、生物医药以及传感器构建方面具有十分重要应用价值 J。基于 漆酶催化的氧传感器在氧的实时监测方面具有重要的应用前景。游离漆酶活力不易保持，难于重复使用且 不能长期贮存，在实际应用中受到很大的限制。固定化漆酶作为一个良好的反应系统，可使游离漆酶的性质 得到优化。 目前用于固定化酶的载体很多。在这些载体中磁性纳米粒子更受人们的关注3【-5]。用磁性纳米粒子 固定漆酶有如下特点：纳米粒子高的比表面可固定大量漆酶；粒子的磁性使得固定化漆酶在磁场作用下能迅 速从反应体系中分离出来，有利于回收和反复使用。 四氨基酞菁铜 (CuTAPc)一Fe304纳米复合粒子表面有大量活性基团一氨基，用其固定化漆酶具有操作 简便，能够提高漆酶的催化效率，易于分离和回收，能反复使用等优点。固定化漆酶可组装在光纤传感器上， 用于监测溶液中氧浓度。下面主要探讨了固定化漆酶的制备及各种因素对固定化漆酶活力的影响，为固定 化漆酶在光纤传感器上的应用打下了良好的基础。 1 实验部分 1．1 材料与仪器 2，2’一连氮一双(3一乙基并噻一6一磺酸)(ABTS)：AR，Sigma公司；血红密孔菌真菌漆酶：中科院北京 微生物研究所提供；其他试剂均为AR级。紫外分光光度计：UV一2450型，日本岛津公司。 1．2 实验方法 1．2．1 四氨基酞菁铜的合成 将4一硝基邻苯二甲酰亚胺 3．84g、尿素 10g、钼酸铵0．05g混合研碎后加入到 250ml烧杯中，加热熔融，待全部熔融后，将研碎的CuCl2·2I-I200．85g加入到熔融物中，用玻棒搅拌均匀， 将温度恒定在 190℃加热，有蓝紫色固体出现，并不断起泡膨胀，起泡膨胀完全停止后，冷却，碎化固体，依次 用300ml1mol／L的HC1和300ml1mol／L的NaOH溶液各微沸 1h后过滤，在空气中干燥 ，得蓝紫色四硝 基酞菁铜。 取0．765g四硝基酞菁铜和2．88g(12reoto1)Na2S9·H20加入到50m1的三颈烧瓶中，加入 l5m1N、N 一 二甲基甲酰胺( F)缓慢搅拌下加热，当温度升至60℃时，加快搅拌速度并恒温 1h．将反应物倾入 150 m1蒸馏水中，抽滤，洗涤至滤液呈中性，将所得固体置于空气中干燥，得墨绿色四氨基酞菁铜。 1．2．2 04纳米粒子的制备 将 FeCh4·I-I20和FeC13·6I-I20按 1：2的摩尔比溶于蒸馏水中，溶解完全后过滤 收稿 日期：2007—05—10 基金项 目：国家 自然科学基金(No项 目资助。 作者简介：周菊英 (1979一)，女，浙江桐庐人，广西工学院信息与计算科学系助教，工学硕士。 2 广西工学院学报 第 18卷 除去溶液中存在的少量的沉淀，在搅拌下滴加6mol／LNaOH溶液，开始时溶液由浅黄色变为红褐色，随着 ∞ 氢氧化钠的加入溶液整个体系渐渐由灰褐色变为带有黑色纳米颗粒