聚乙二醇化学修饰重组人干扰素α-1b的初步的研究.pdfVIP

聚乙二醇化学修饰重组人干扰素 a一1b的初步研究 杨宇峰1 黄静2徐帆洪1吴腾捷1 吴自荣2 楼觉人’ 1．上海生物制品研究所；2．华东师范大学生命科学学院 【摘要】 种不同的第二代PEG衍生物对rhlFNa-lb进行修饰，并对反应pH值、温度、时间、修饰剂用量等修饰条件进行 比较，选择最佳反应条件。结果研究发现PEG的电泳表观分子量大于其实际值，修饰条件中修饰剂用量和 pH值是主要影响因素，时间和温度影响甚微。结论选择了合适的PEG衍生物做为IhIF№1b的修饰剂，优化 了修饰条件，为迸一步深入研究奠定了基础。 【关键词】 聚乙二醇；重组人干扰素a-lb；化学修饰 重组人干扰素Ⅱ一lb(rhIFNa．1b)是我国自行开发 的基因工程干扰素，拥有自主知识产权…。rhlFNa-应，4cc，2hr，取样进行SDS电泳。 lb具有广谱的抗病毒作用，与国内外同类产品相 比，具有副作用较小、不易产生中和抗体、成本低廉 等优点，更适合中国人使用。但它也存在着生物半 衰期短，患者需反复长期注射药物等缺点。聚乙二 电泳。 醇(PEG)修饰技术能够起到增强蛋白质类药物的稳 定性，降低免疫原性，延长生物半衰期等作用怛]。本 研究应用3种不同的第二代PEG衍生物对rhlTNa一反应时间分别为0．5—24hr，同时终止，取样进行 1b进行化学修饰，从中选择最佳修饰条件，为进一 SDS电泳。 步深入研究奠定了基础。 8．rhⅡ№．1b与PEG反应温度对修饰产物的 材料与方法 1．干扰素样品：重组人干扰素a．1b(recombinant humaninteffeton a．1b，rhlFNa．1b)：2．173rng／ml，上海生 物制品研究所。 1：35，4qc反应2hr，取样进行SDS电泳。 5000Da、10000Da、10．凝胶成像及其分析：通过凝胶电泳成像系 2．修饰剂iPEG(Mw 20000Da)：Nektar。 统获得凝胶图谱，并用凝胶成像系统配套软件对凝 3．试剂与仪器 胶图谱进行扫描分析。根据标准蛋白计算PEG和 试剂：丙烯酰胺、甲叉双丙稀酰胺、TEMED、SDS、修饰产物分子量。以修饰干扰素条带的体积比干扰 素条带的总体积，计算干扰素样品的修饰率。 考马斯亮蓝R．250，Sigma。其余试剂均为国产分析 纯或生化纯试剂。 结 果 仪器：Mini．PROTEIN3型电泳槽，Bio-rad。nuo— rescentTables Combi．Li。ght凝胶电泳成像系统及配套 软件，VILBERLOURMAT。 4．PI临的表观分子量：PEG5000、10000、20000 量大于理论值，PEG5000的平均表观分子量为 干粉分别溶解于硼酸．硼砂缓冲液(pH9．0)中，终浓 PEG20000的平均表观分子量为39862Da。 度10mgml，取样参照Laemmh方法[3]进行SDS- PAGE电泳，采用改良的kurfurst方法碘染色HJ。 5．PEG修饰I-]IIFNIIt．1b的反应产物：dalFNa．Ib ·267· 饰rhlFN口．1}，的反应影响币明硅．4—37鼍：修饰率在 10000、20000反应均产生多种修饰产物．根据其表观 967％和