大白菜抗黑斑病突变株筛选技术研究.pdfVIP

中国农学通报2000年第16卷第6期 大白菜抗黑斑病突变株筛选技术研究 扬广东1 郭勤平2马树斌3薛建兵1 张战备1 (1山西农科院棉花研究所园艺室运城0440002山西省临汾地区农业学校3山西省长治实验中学) 黑斑病[A／temadabrassL＆te(Berk．)Sacc．]是带柄子叶作为外植体，接入含毒素的培养基(改良 近年来在我国北方流行的大白菜真菌病害，开展大 白菜抗黑斑病育种已成为当今生产与科研中一项紧 Gelrite+1．69∥L 29／L M902)中，培养在25～ 迫的任务。根据体细胞无性系变异的理论，植物的 28℃、光照16h的条件下，外植体切口边缘先长出 离体组织在分化成愈伤组织的过程中，细胞染色体 愈伤组织，不久分化出绿芽，约1个半月就长出小 的数目或结构会发生变化，引起基因突变，这样的 苗，把小苗切下接人生根培养基，约20d就长出根 愈伤组织进一步分化成苗，其中就有可能出现有变 系，即可进行移栽。 异的单株。如果在愈伤组织分化过程中，把黑斑病 1．4．2间接筛选法先将带柄子叶外植体接人不 的病菌毒素作为选择压力，加进培养基中，可以有 含毒素的培养基(改良MS+BA 2．0mg／L+NAA 目的地把抗病突变体有效地筛选出来。近年来已有 0．2rag／L+309／L葡萄糖+29／LGelrite+1．699／L 很多报道成功地用体细胞无性系变异的方法从水 Mgcl2)中。约25d，外植体沿切VI长出较多的愈伤 稻、马铃薯、番茄和小麦等作物中筛选出抗病突变 组织，把愈伤组织切下接入含毒素的培养基(改良 体。用大白菜进行抗病突变体筛选研究的报道并不 掩+BA4．Omg／L+NAA0．2n世o／L+30s／L葡萄糖+ 多。该文旨在报道利用大白菜带柄子叶作为外植 体，在含有黑斑病毒素的培养基中筛选大白菜抗病 20d，大量愈伤组织在毒素的影响下褐化死亡，把 突变体的方法和结果。 存活的但未分化的绿色愈伤转至不含毒素的相同培 1材料与方法 养基上，再经过约30d，在存活的愈伤组织上能分 1．1供试品系 以大白菜品系GP一14为主要试化出少量绿芽，移至生根培养基中继而长成小苗。 材，该品系中晚熟、高产、属茼型，抗霜霉病和病 2结果与讨论 毒病，但不抗黑斑病。 2．1 不同筛选方法的再生苗分化频率比较 1．2黑斑病毒素的生产及毒素培养基的配制用 2．】．1 直接筛选法大白菜带柄子叶在畲毒素和 从当地采集到的大白菜黑斑病菌株接种于PDA液 不含毒素的相同培养基中，再生苗分化频率分别为 体培养基中，20—25℃下静止培养7—8d，即生成1．6％和82．5％，由于毒素的影响，分化频率急剧 浅棕色的培养液，经0．45pm的微孔滤膜真空抽下降，可见毒素在培养基中起到了选择压力的作 滤，得到黑斑病毒素粗滤液。按试验要求配好所需 用。而且前期试验表明，毒素浓度过高，外植体不 的培养基，高压灭菌后在培养基冷凝前(约 能分化，很快褐化死亡；浓度太低，起不到筛选的 45℃)，用无菌注射器加入毒素粗滤液，浓度为 作用，通过试验比较了几种不同毒素浓度对外植体 20ml／L培养基，冷却待用。 分化的抑制作用，初步认为2％的浓度比较合适。 1．3再生苗抗病性鉴定按杨广东等的方法对试 这一方法的优点是可以在较短时间内筛选出一定数 管再生苗抗病性人工接种鉴定，于接种后8d调查 量的再生苗，进一步作抗病性鉴定，从中再选出抗 叶片病斑的多少，计算每株的病情指数。