人支气管上皮细胞系恶性转化的研究.pdfVIP

-实验研究· 人造矿物纤维诱导人支气管上皮细胞系恶性转化的研究 朱丽瑾张敏鞠莉肖芸张幸 【摘要】目的比较温石棉、难溶性陶瓷纤维(RCF)、玻璃棉(GW)、岩棉(RW)对人支气管上皮细 胞BEAS．2B细胞株的细胞毒性与致恶性转化的能力。方法检测温石棉、RCF、GW、RW对BEAS-2B 的细胞毒性；BEAS-2B细胞每10d染毒24h，共染毒6次，待细胞出现生长抑制后，用锚着不依赖性生 长实验判断细胞恶性转化。结果温石棉、RCF、GW、RW均对BEAS一2B细胞具有细胞毒性，并呈剂 量一反应关系。染毒6次后，温石棉组、RCF组细胞生长速度加快，排列紊乱．失去接触抑制，出现复叠 层生长，并可在软琼脂上生长，细胞集落形成率分别为4．6％和7．2％，与阴性对照组比较，差异有统计 学意义(尸℃O．05)；而GW组和RW组细胞集落形成率分别为O．6％和0．4％，与阴性对照组比较，差异无 统计学意义(尸o．05)。结论温石棉组、RCF具有使BEAS．2B细胞发生恶性转化的能力，GW、RW染 毒60d未能使BEAS．2B细胞发生恶性转化。 【关键词】矿物质纤维；细胞毒性，免疫；细胞转化，肿瘤 石棉由于具有耐热、保温、耐磨、电绝缘以及耐化学腐蚀 2．纤维制备：UICC温石棉、RCFl80。C烘烤2h，玛瑙研钵 等优良的性能被各个领域广泛使用，但凶其危害严重，已被 研磨30min，称重后加超纯水配成5ms／m1混悬液，高压灭 rain。 确定为人类致癌物…，越来越多的国家对石棉的使用进行了 菌。用前超声震荡10 严格限制，为了降低石棉对人体健康的危害，提倡使用石棉 3．细胞毒性实验：BEAS．2B细胞用含质量分数为10％的 mineral 胎牛血清的RPMI1640培养液，在37℃，5％CO：饱和湿度 替代品。人造矿物纤维(man．madefibers，MMMFs)是 目前主要的石棉代用品，其中，最常用的有：玻璃棉(gl鹊s 的环境中培养，细胞隔日换液．每3_4d传代1次，按14接种。 将对数生长期的BEAS．2B细胞经质量分数为0．25％的 wool，GW)、岩棉(rockwool，RW)、难溶性陶瓷纤维(refractory 04 ceramicfibers，RcF)等阁。2002年，国际癌症研究中心(IARC)胰酶消化、吹打分散后计数，用全培养液配成浓度为5x1 将某些矿物纤维包括RCF，一些特殊用途的矿物纤维如E一 个钳的细胞悬液，按100“吼(5x103个／孑L)的密度接种于 玻璃棉、“475”玻璃棉定为2B类，“对人类可能有致癌作用”； 96孔培养板上。放入37℃培养箱中。四周边缘孔不接种细 而将另一些矿物纤维包括绝缘玻璃棉、RW、矿渣棉、玻璃丝 胞，只加入100“l，孔的DMEM培养液，起边缘封闭作用，并 定为3类，即“对人类的致癌性未定”四。由于MMMFs种类繁作为本底组。细胞接种后24h，分别翻转弃去旧培养液，样本 多。而且近年来的研究结论不一，尚不能确定MMMFs是否具 有人类致癌性。目前，在动物实验中已证实RCF具有致癌 性，但缺乏对人类致癌性的相关证据，对GW的研究结论不 相应量细胞培养液与纤维但没加入细胞)以排除纤维对吸光 度(A)的影响，阴性对照加入等量的超纯水，每种纤维及浓度 一。因此，我们选择较常用的3种MMMFs(RCF、GW、RW)进 行上皮细胞恶性转化研究，以期为MMMFs人类致癌性研究分别做5份平行测定，置培养箱中继续培养24h。取出孔板， 提供理论依据。 每孔加入10¨lCCK．8溶液，2h后在酶标仪上振荡10rain， nm，参考波长为650nm。以各样 一、材料与方法