猪TMEM66基因克隆、定位以和组织表达谱分析.pdfVIP

86 第十一次全国畜禽遗传标记研讨会论文集 猪TMEM66基因克隆、定位以及组织表达谱分析 李新云1，王志伟2， 李奎2。 (1华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉430070 2动物遗传资源与利用农业部重点开放实验室，北京100193) 摘要：本研究对猪新基因TMEM66基因进行了克隆、定位以及组织表达谱研究．分离到了猪TMEM66 l 基因cDNA片段长度为1886bp，包括完整的编码框101bp，推测编码蛋白包括336氨基酸残基．运用 巴结、脾、肺、脑和胃组织高表达，而在肌肉、心以及啮肪组织中低表达． 关键词：猪；TMEM66；基因定位；组织表达谱 膜蛋白是一类重要的功能蛋白，它们构成了离子的跨膜通道以及信号分子受体：负责调节细胞间物 质、信息交换，在机体中执行代谢调节、生长调控、免疫应答等多种生物学功能。跨膜蛋白66 (Iransmembrane protein 人中TMEM66基因随着生长发育呈上调表达模式；癌变组织中TMEM66基因下调表达。芯片杂交数据 显示人TMEM66基因在分化成熟的淋巴细胞、单核细胞以及树突细胞中高表达，而在白血病细胞、恶性 J。 胞中该基因下调表达2倍以上Il 过表达研究时发现TMEM66基因过表达有一定的促进凋亡的作用12J。 with 酵母双杂交研究发现TMEM66蛋白与IFIT5(interferon．induced 5)蛋 protein repeats tetmtricopeptide 白发生相互作用[31，IFIT5蛋白的功能日前还不清楚。以一卜研究表明TMEM66可能是和细胞凋亡以及癌 症发生相关的重要功能基因，免疫细胞可能是TMEM66的重要靶细胞。在本研究中，我们对猪的TMEM66 基因进行了研究。克隆了猪孙ZE^彤6基因编码区全长，定位了猪TMEM66基因并运用多重PCR的方法 分析了猪TMEM66基因的组织表达分布，为进一步研究TMEM66基因功能提供新的数据。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1核酸样品 用于基因克降的大白猪DNA样品由实验室保存。用于表达分布研究的五指LIJ猪组织样采自中国农 业科学院畜牧研究所猪场，Tfizol试剂提取总RNA，--80℃保存。 1．1．2用于基因染色体定位的DNA样品 radiation 猪辐射杂种板(INRA-Minnesota porcine hybrid de Cellulaim，INRA)和美国Minnesota大学共同构建的，由珐国MartinYerle博士惠赠，用于 Gdndtique 染色体的精细定位研究。这套杂种板包括118个猪×仓鼠辐射杂种细胞系DNAl4I。 1．2试剂 TRIzoL总RNA提取试剂盒购自GIBCORRL公司，PCR纯化试剂盒、凝胶回收试剂盒及质粒提取 试剂盒均购自北京天根生化科技有限公司。Taq酶、T克隆载体试剂盒购自大连宝生物公司。限制性内 切酶为MBI 作 者：李新云，男．1976-，博士，讲师。主要研究方向：动物遗传育种与繁殖。E-mail：hzaulxy@163．tom． ikuihau@yahoo．COIll． 1 No．1 Animal Bulletin (October2008)Voi．1 Biotechnology 87 1．3方法 1．3．1猪TMEM66基因克隆 猪TMEM66 用DNAstar软件进行拼接得到猪烈础6基因的cDNA序列15J。然后根据这个序列设计一对引物：左引物： 物，以猪的cDNA为模板扩增猪TMEM66基因。PCR反应总体积为20止，其中模板cDNA为50ng，lxb