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微生物工程概论 一、微生物工程：是微生物学与工程学有机结合的产物。它由工程技术与微生物学相互渗透形成。是研究和发展微生物产业的有用产品和有益活动的学科。 二、微生物工程的应用 1、在食品工业的应用：微生物技术最早开发应用的领域，至今产量和产值仍占微生物工程的首位 （1）食品加工：单细胞蛋白（酵母、真菌等） （2）含醇饮料：葡萄酒、黄酒、白酒、啤酒、白兰地、威士忌 （3）发酵乳制品：奶酪、酸奶 （4）调味品：味精、肌苷酸、酱油、醋等 2、在医药卫生中的应用 （1）抗生素：12 000余种：青霉素、金霉素、四环素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、螺旋霉素、头孢霉素等 （2）氨基酸：可发酵生产的有谷、赖、丙、组、异亮、亮、苯丙、脯、苏、色、酪、缬、瓜、鸟氨酸（国内40亿元，占发酵业产值12%） （3） 维生素：VB2 、VB12、Vc、VA、VD等 （4）生物制品：亚单位疫苗、重组疫苗、DNA疫苗等 （5）酶抑制剂：棒酸（可抑制(-内酰胺酶对青霉素的破坏）； (-淀粉酶的抑制剂可治疗糖尿病；胆固醇抑制剂可治疗高血压高血脂 3、在轻工业中的应用 （1）糖酶：(-淀粉酶、(-淀粉酶、异淀粉酶、木聚糖酶、葡萄糖异构酶、半乳糖酶、纤维素酶等 （2）蛋白酶：碱性蛋白酶（洗涤剂、皮革鞣化、啤酒去浊）；酸性蛋白酶（饮料、制蛋白水解物）；中性蛋白酶（皮革脱毛、蚕丝脱胶、蛋白胨制备） （3）果胶酶：果汁果酒澄清、苎麻脱胶 （4）脂肪酶：分解脂肪为脂肪酸和甘油 (5)凝乳酶：制干酪 (6)氨基酰化酶、甘露聚糖酶等 4、在化工能源中的应用 (1)醇及溶剂：乙醇、甘油、异丙醇、丙酮、丁醇、丁二醇等 (2)有机酸：醋酸、丙酸、乳酸、琥珀酸、苹果酸、衣康酸、水杨酸等 (3)多糖：黄原胶、海藻糖等 (4)清洁能源：氢气、微生物燃料电池等 5、在农业中的应用 (1)生物农药：杀虫剂（Bt、白僵菌、病毒、微孢子虫）; 防治植物病害（假单孢菌、木霉、弱病毒、庆丰霉素） (2)生物除草剂：利用杂草的病原微生物 （3）生物增产剂：根瘤菌、蓝细菌、钾细菌、磷细菌等 6、在环境保护中的作用：污水处理（厌气法、好气法） 7、在高技术领域中的应用：基因工程的各种工具酶等 三、微生物工程面临的挑战和发展趋向 （一）面临的挑战 1、化学合成工业的竞争：有机溶剂，如丙酮丁醇 发酵法产品所占份额已很少 当然也有多种原来通过化工合成的产品逐渐被发酵法所取代，如乳酸 2、农业生物工程的冲击： 转基因植物中表达生产PHB、抗体、药物、植酸酶（将饲料中的有机磷转变为动物可以利用的形式，减少粪便中的磷，降低饲养场地区的污染）等 （二）微生物工程发展趋向 1、提高现有微生物发酵工业水平 2、利用重组DNA技术 3、开拓极端酶 极端酶：由于极端酶的极端稳定性，为开拓新的生物催化和生物转化提供了广阔的应用前景。 第二章 菌种来源 一、发酵工业对微生物菌种的要求 尽管工业用微生物菌种多种多样，但作为大规模生产，选择菌种应遵循以下原则： 1、能在廉价原料制成的培养基上迅速生长，并形成所需的代谢产物，产量高。 2、可以在易于控制的培养条件下迅速生长和发酵，且所需酶活力高。 3、根据代谢控制的要求，选择单产高的营养缺陷型突变株或调节突变株或野生菌株。 4、选育抗噬菌体能力强的菌株，使其不易感染噬菌体。 5、菌种纯粹，不易变异退化，以保证发酵生产和产品质量的稳定性。 6、菌种不是病原菌，不产生有害的生物活性物质和毒素，以保证安全。 二、代谢控制发酵：用人工诱变的方法，有意识地改变微生物的代谢途径，最大限度地积累产物，这种发酵形象地称为代谢控制发酵，最早在氨基酸发酵中得到成功应用。 三、常用的基因表达系统 (一)原核生物：大肠杆菌(1977年Boyer)、枯草牙胞杆菌、沙门氏菌 1、生长迅速、蛋白产量高; 2、表达蛋白的纯化、分离及分析快速； 3、外源基因的导入相对容易； 4、已建立了整套表达理论及技术. (二) 真核细胞表达系统：酵母(既是微生物又是真核细胞) 1、生长迅速，营养要求不高，易培养； 2、安全性好； 3、比哺乳动物细胞操作简单； 4、具有一定的修饰蛋白的能力。 中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）表达系统 1、具有准确的转录后修饰功能； 2、具有产物胞外分泌功能，便于下游产物分离纯化； 3、具有重组基因的高效扩增和表达能力； 4、具有贴壁生长特性，也可进行悬浮生长； 5、CHO很少分泌自身的内源蛋白。 四、菌种分离 (一)菌种分离的一般过程 1、土样的采取 2、预处理 3、培养 4、菌落的选择 5、产品的鉴定 （二）采样时要注意的问题： 1、气候、水分、空气 2、来源要广 3、结合产品的特点 4、标签：地点、时间、气候等 （三）目的微生物富集 1、富集的目的：让目的微生物在