抗人大肠癌单链抗体基因的克隆与表达.pdfVIP

《 》 5 6 癌症 ： !# $%’()( *+,-’./ +0 $.’1(-2 3##32 3 4 ! !# 7 ! 抗人大肠癌单链抗体基因的克隆与表达 方 瑾， 宋今丹 5 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室，辽宁沈阳 44### 46 【 】 摘 要 背景与目的：单链抗体相对于完整抗体具有免疫源性低、对肿瘤组织穿透力强的特点，日益成为肿 瘤诊断和治疗的良好导向载体。本研究的目的是将抗人大肠癌单克隆抗体 的重链可变区 和轻链可变区 基 ?@84 AB AC 因借助一短肽序列5 D/E F(-6 进行重组，构建单链抗体基因?@84)1GH ，并使其在大肠杆菌中表达。方法：采用I8J$I 技 术从能够分泌 单抗的鼠杂交瘤细胞中扩增 和 基因，通过重叠延伸拼接 在 和 基因间引入连 ?@84 AB AC J$I AB AC 接短肽，体外构建 （ ） ?@84)1GH 基因，经过常规转化和筛选，将其克隆至JK83:. L 表达载体，由MJD 诱导在大肠杆 菌 NC3 4 中表达为?@84)1GH 与B)8.O 的融合蛋白。表达产物用?8?P -()’ 亲和层析方法纯化，并采用KCMFP 方 法检测其免疫活性。结果：序列分析表明， 基因全长 ， 位于上游； 位于下游。 ?@84)1GH !3 QR AB ;QR AC #QR F@F8JPDK 显示，重组蛋白相对分子量#S@. ，与预期结果一致。)1GH 表达产物以不溶性包涵体形式存在，经亲和层 析纯化后蛋白纯度达9T 。KCMFP 结果显示)1GH 保留了与亲本抗体?@84 相似的免疫活性，结论：成功地构建了抗 人大肠癌单链抗体?@84)1GH ，并在大肠杆菌中获得了较高水平的功能性表达。 关键词：单链抗体（ ）； 大肠肿瘤 ； 基因表达 )1GH 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） !;U P 4###8=!V 3##3 #! 7 #!# 7 #; !#$%$ ’$( )*+,-..%#$ #/ 0%$- !1’%$ 23 4-$- ’’%$.5 678