丙型肝炎病毒感染模型的研究进展.pdfVIP

维普资讯 堂匡堂鍪志2006年1月第6 · 91 · - 综 述 · 丙型肝炎病毒感染模型的研究进展 龚育平 综述，戚中田 审校 (第二军医大学微生物学教研室 全军医学微生物学重点实验室。上海 20o433) 摘【要】 丙型肝炎病~(rICV)自然宿主范围很窄，建立理想的实验模型便成为研究其生物学特征及进行 药物筛选和疫苗效果评价的关键之一。本文就近年来在HCV感染模型这方面的研究进展作一综述。 关【键词】丙型肝炎病毒；细胞模型；动物模型；复制子 中图分类号：R512．63 文献标识码：A 2005年2月美国PNAS杂志，报道了Heller等[1]建立 到增强病毒RNA复制水平的效果 【1。HCV亚基因组复制 的一种HCV全长eDNA细胞复制模型。该模型将HCVlb 子细胞模型的建立使人们能从分子水平上在培养细胞中 型全长eDNA克隆至真核表达载体pTRE2hyg+，通过转染 了解病毒复制的全过程，因而也使得人们能够以此为借鉴 Huh7细胞成功表达出病毒蛋白，并组装释放出病毒颗粒， 来评估包括 干扰紊、利 巴韦林、HCVNS3．NS4A蛋白酶 为 HCV研究提供了一个细胞系统，是 HCV实验模型研究 抑制荆等多种抗病毒药物单独或联合应用的作用机制及 的一个突破。本文拟就Heller等 【]的工作及近年来HCV 疗效[7-9]。不过这一复制模型中的HCV其特性也可能会发 实验模型方面的研究进展做一综述。 生一定变化 ，Bulll‘等[10]选取了一株在Huh7细胞中经历适 应性突变能稳定复制的HCV克隆，将其接种黑猩猩后发 1 HCV的细胞复制模型 现不能有效复制。表明经历了适应性突变的亚基因组 1999年Lohraann z]构建的HCV亚基因组复制子细胞 HCVRNA的感染性降低 以这一模型为基础，Nedderrnann 模型是近年研究最多的，该复制子是以一段从HCV感染者 等[u]在培养系统中添加了p58(NS5A的磷酸化形式，能抑 肝组织中分离出的HCV基因组为基础。删除其c．NS2基因 制HCVRNA复制)抑制剂，使病毒RNA不需要发生适应 区并插入neor基因和鼠脑心肌炎病毒(enccphalomyocarditis 性突变就能有效支持 HCV复制子的表达。Kato等[12]也成 virus，EMCV)基因的内部核糖体进入位点(IRES)序列。这 功 的在非肝源性 的Hela和 293细胞中实现 了HCV亚基 个亚基因组复制子具有抗磷酸新霉素 (G418)抗性，5’． 因组复制子的表达，且经过基因序列分析发现在这两种细 NTR的IRES指导第一个顺反子(neor)的翻译 ，EMCVIRES 胞中复制子基因序列中的适应性突变对于其有效表达并 指导第二个顺反子(NS3—5B)的合成。将该亚基因组复制子 不一定是必须的。 转染人肝癌细胞系Huh7细胞，通过含G418的培养基筛 除了亚基因组复制子细胞模型，在HCV全长 eDNA 选而获得可持续表达复制子RNA的细胞模型。后来的研 细胞复制模型的研究中也取得了一些突破。Sun等[”]建立 究发现，有两个主要因素影响复制子的表达效率，一是细 了一种以HepG2细胞为宿主的HCV全长 CDNA复制模 胞 自身的状态：一方面处于快速生长期的细胞其胞 内复制 型，在该模型的细胞内能检测到对 干扰索敏感的病毒负 子表达水平很高。另一方面细胞为了抗御病毒的复制会调