提高PCR产物的几种有效方法.pdfVIP

维普资讯 生物技 术通报 · 技 术 与 方 法 · BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2003年 第 2期 提高 PCR产物 的几种有效方法 李爱丽 ，2 姜涛 马峙英2 贾继增 (·中国农业科学院作物品种资源研究所 农业部作物种质资源与生物技术重点开放实验室，北京 100081； 河北农业大学农学院 ，保定 071001) 摘 要： 结合作者的工作实际，着重介绍了有效提高PCR产物的几种方法：如怎样高效快速地设计 PCR引 物 ，怎样尽快确定 PCR反应的最适退火温度，如何提高GC富集区的扩增效率等，为分子生物学工作者提供一些可 以借鉴的方法及经验 。 关键词 ： 聚合酶链 式反应 PCR引物 GC富集区 梯度 PCR SeveralM ethodologieson ImprovingthePCR Products LiAili· JiangTao MaZhiying2 JiaJizeng (Key~ atoryofCropC,er~plasmResourcesandBiotechnologyMinistryofAgricultureInstituteof CropGermplasmResourcesChineseAcademyof Agricultural＆矗，lc ，Beljing100081； 2A culturalUniversityofHeB~，Baoding071001) Abstract： Combiningtheauthor’Sworkingexperiences，weintroducehereseveralmethodologiesonimprovingthe PCRproducts，suchasthedisciplineswhichweshouldabidebywhenwedesignPCRprimers；how tOdeterminetheap— propriateannealing temperatureofthePCRreaction；how Ot improvetheamplifying efficiencyof theGC richregion．W e hopeOt providesomemethodologies fortl~ewho doresearchinmicrobiology． Keywords： Polymerasechainreaction PCRprimer GC richregion GradientPCR 聚合酶链 式反应 (polymerasechainreaction， 设计引物 ，先要把这条序列保存为．txt文件，然后利 PCR)最早 由Mullis于 1987年发明，现已成为实验 用DNAstar中的Editseq把纯文本文件转换为．seq 室常规的操作 ，并已实现 自动化。随着该技术的 日 文件 ，这样就可以进行引物设计 了。对于引物参数 趋成熟与完善 ，它 已被广泛应用于分子生物学研究 的取值可根据 自己实验的要求来设置。通常情况 的各个领域。采用 PCR技术可以有效地从基 因组 下，应用软件设计引物具有方便 ，快速等优点。但是 DNA或 cDNA文库中扩增 目的基因，用以改 良农作 对于一些有特殊要求 的PCR反应来说，例如 SNP 物或其它有用生物的性状 ，为人类造福。但在实际 的DASH检测 ，其 PCR引物设计应用上述软件均不 操作 中，PCR引物设计 ，PCR反应最适退火温度 的 能获得有效引物，这时，实验者就应考虑根据 PCR 选择以及 GC富集区的扩增效率等问题