微生物脂肪酶的固定化及其在非水相催化中的应用研究.pdfVIP

　第 3 1 卷 第 1 期 工 业 微 生 物 　Vol . 3 1 No . 1 　 　200 1 年 3 月 Industrial Microbiology Mar . 200 1 微生物脂肪酶的固定化及其在非水相催化中的应用研究 徐 　岩 , 　李建波 (无锡轻工大学生物工程学院 ,江苏无锡 2 14036) 摘 　要 : 　论述了应用于非水相酶催化反应的脂肪酶的固定化方法 ,载体与溶剂对固定化脂肪酶活 力的影响 , 以及非水相中固定化脂肪酶催化反应的形式 。 关键词 : 非水相 ; 　微环境 ; 　酶活性 1 　引言 　　⑶溶剂沉淀法[ 1 ] 。即在低温下向含有载体的 ( ) 脂肪酶液中加入酶的有机溶剂作沉淀剂 如丙酮 , 　　非水相酶催化的诞生虽然只有十几年的历史 , 使酶析出 ,沉淀在载体表面 。此法所得固定化酶酶 但在其理论研究方面已经取得进展 。非水相中酶催 活较高 ,载体性质对固定化无明显影响 ,但酶在载体 化的研究 ,不仅为酶学研究注入了新的活力 ,而且拓 表面分布不均匀 ,在非水相中有碍于脂肪酶活力的 宽了酶的应用范围和领域 。近些年来 ,众多的研究 正常发挥 。 报道和综合评述展示了非水相中的酶可能优于水相 　　⑷游离固定化法[3 ] 。即将具有一定亲水性的 中的酶 。但由于酶在溶剂中不溶解 ,反应过程中容 载体分散于疏水溶剂中 ,另将酶粉溶入少量缓冲液 易结块 ,大大降低了酶的可利用率 。如果将酶固定 的酶液加入 ,振荡或搅拌一定时间后 ,便得固定化 化在惰性载体上 ,则可以提高酶在溶剂中的扩散效 酶[4 ] 。其原理是 :亲水性载体可在其表面形成一层 果和热力学稳定性 ,调节和控制酶的活性与选择性 , 有利于酶的回收和连续化生产 。 水膜 ,酶分子不溶于溶剂 , 只能存在于这层水膜中 , 因而可以完全被固定化 。这种方法不需要任何键合 2 　非水相酶催化用的脂肪酶固定化 手段就可以将酶固定化在载体上 ,是一种在微水环 　　目前对固定化脂肪酶在非水相中的应用已有许 境中有效的固定化方法 。 多研究 。几乎所有固定化方法都可以用来制备非水 　　以上所涉及到的固定化方式 ,都是直接将酶固 相酶催化的固定化酶 。但由于酶在溶剂中不同于水 定化到载体上 ,而如果对脂肪酶进行一些有利于非 中 ,不存在脱落流失问题 ,因此吸附法最为常用 。吸 水相反应的修饰之后 , 再固定化 , 则效果会更加明 附法通常有四种形式 : 显 。如Basri M . 等人[5 ] 将 Can di da r ugos a 脂肪酶 　　⑴水相固定化法 。这是最常见的吸附固定化 用单甲氧基聚乙二醇修饰后 , 固定化到有机聚合珠 方法 ,即将脂肪酶溶解于缓冲液中 ,加入硅藻土