鱼源气单胞菌的分离鉴定及血清学调查.pdfVIP

· 78 · (总第 136期) 水 利 渔 业 2004年第24卷第6期 鱼源气单胞菌的分离鉴定及血清学调查* 董传甫，林天龙 ，俞伏松，陈日升，龚 晖，陈振海 (福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州 350013) 摘要：应用生化鉴定和PCR技术对 1999--2001年主要分离 自福建省患典型败血症鳗鲡的气单胞菌进 行精细的鉴定，结果共得到气单胞菌 115株，其中嗜水气单胞菌69株，温和气单胞菌29株，豚鼠气单胞菌2 株和未定种气单胞菌15株。45株可被典型分型于5个主要血清型；福建鳖源嗜水气单胞菌优势血清型为0 ：Ah10501，鳗源气单胞菌分离株主要分布于O：Am0501、O：YT一1、0：CHS一3和O：CQ一1等 4个血清型。 非福建分离株则集中分布在0： l9617(0：9)。LPSs免疫印迹法既能用于不同血清型菌株脂多糖的结构分 析，又能对常规血清学分型结果进行校正，其结果更直观、准确。 关键词：气单胞菌；分离；鉴定；血清型；脂多糖；免疫印迹 中图分类号：$941．42 文献标识码：A 文章编号：1003—1278(2004)06—0078—04 运动气单胞菌MotilegenusAermonas对水产养殖业 1 材料与方法 的危害已得到普遍的认同[1--3]，对由致病性气单胞菌所 引发疾病的有效防治成为水产养殖成功的关键 因素之 1．1 细菌来源 一 。 已有的研究表明。气单胞菌的暴发和流行总是表现 本研究的细菌主要为本研究室 自行分离鉴定，分离 为一定的优势血清型[2--5]。而气单胞菌的优势血清型又 源主要集中在福建省的长乐、福清、连江、莆田等主要鳗 与其寄生的宿主、宿主周边的环境条件都有一定的关 鲡养殖场患败血症的养殖欧洲鳗鲡或 日本鳗的病灶处， 系l5]。精确的血清学定位有利于及时把握病源流行动 少量菌株分离 自患病中华鳖和其他发病淡水养殖鱼。非 态，且对于有关疫苗的制备和应用具有重要的指导意义。 福建分离株见表 1。嗜水气单胞菌参考菌株Ah10501购 国际上于20世纪80年代中后期至90年代中期对主要来 自北京陆桥公司，温和气单胞菌CI9—11购 自中科院水 自临床人源分离株和环境源分离株进行了较为系统的血 生生物研究所，ATCL7966由浙江省淡水研究中心钱冬先 清学分型研究，国内则比较关注气单胞菌对水产养殖业 生提供。 的危害，但较大规模的血清学分型试验却鲜有报道。福 1．2 细菌的分离与鉴定 建省地处亚热带，是水产养殖大省，特别是鳗鲡和中华鳖 1．2．1 细菌的生态及生化鉴定 常规方法对分离细菌 的养殖在国内占有重要的地位。近年来，有关气单胞菌 进行革兰氏染色，革兰 氏阴性菌做进一步的氧化酶试验 引发养殖鳗鲡的细菌性败血症也多有报道，最常见的由 和更为详细的生化鉴定。生化鉴定参考 《新编革兰 氏阴 致病性嗜水气单胞菌 Aeromonash3drophila引起的鳗鲡 性菌鉴定编码手册)[]上的21项生化指标辅以七叶苷水 败血症表现为体表充血乃至溃烂、血性腹水、胃内积水、 解、葡萄糖产气和 O／F试验；动力实验为：接种细菌于半 肠炎、肝脾等组织败血等系列严重病变[·7l，每年都能引 固体培养基中，30℃隔夜生长后判断其生长情况。其它 起养殖鳗鲡的大批量死亡。本研究对主要分离 自患典型 生化试验及其结果判定参照产品说明进行 (微量生化管 败血症的鳗鲡和发病中华鳖的气单胞菌进行较为精细的 主要购 自杭州天和生化试剂公司)。根据生化鉴定的结 鉴定并对其进行血清学划分，试图把握该菌在本地区流