2013浙 科版选修1第四部分《实验十三 DNA片段的PCR扩增》word学案.docVIP

DNA片段的PCR扩增 PCR是一种在体外迅速扩增DNA片段的技术，这一技术在遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆等方面都有着广泛的应用，本课题的目标是了解PCR技术的基本原理，并尝试用PCR技术扩增DNA片段。 细胞内DNA复制条件分析： 条件 组分 作用 模板 DNA的两条单链 提供复制的模板 原料 四种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料 酶 DNA聚合酶 催化合成DNA子链 能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能 引物 一小段单链DNA 为DNA聚合酶提供合成的3’端起点 PCR反应体系 10x Buffer 5 μL MgCl2（25mM） 5 μL dNTP (2.5mM) 1 μL 上游引物(10pmol) 1 μL 下游引物(10pmol) 1 μL Taq酶（5u/μL） 0.5 μL 模板DNA 1 μL ddH2O 35.5 μL Total 50 μL 二、PCR的反应过程 1.变性（模板DNA解旋） 模板DNA经加热至90℃以上。一定时间后，使模板DNA双链解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备。 2.复性（退火） 模板DNA经加热变性成单链后，温度降到50℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 3.延伸 DNA模板－引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料