血管性血友病因子裂解酶抗原及活性与年龄及性别的关系分析.pdf

血管性血友病因子裂解酶抗原及活性与年龄及性别 的关系分析1 董宁征，季顺东，阮长耿 苏州大学附属第一医院，江苏苏州（215006 ） E-mail ：changgengruan@ 摘 要：目的：通过检测健康体检者血浆中ADAMTS13 的抗原及活性，比较不同性别和年 龄组间ADAMT13 的抗原及活性的差别，分析ADAMTS13与年龄及性别的关系，为 ADAMTS13相关疾病的判断提供依据。方法：用Frests-VWF73试剂盒检测血浆中ADAMTS13 的活性；用夹心酶联免疫反应试剂盒（ELISA ）检测ADAMTS13抗原含量。结果：各年龄组 ADMATS13 的活性均值无显著差异；而ADAMTS13抗原量随年龄的改变而改变，21-40岁 年龄组最高，为109.7 ± 23.3 % ，在60岁以上组及低龄组（16-20岁）显著降低；ADAMTS13 的抗原及活性水平在男女性别间无显著差异。 关键词：血管性血友病因子裂解酶; 抗原; 活性；年龄；性别 血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13) 是一种调控血管性血友病因子（vWF ）结构与 功能的金属蛋白酶，其作用于vWFA2 区 842位酪氨酸与843 位蛋氨酸之间的肽键，将VWF 3 3 [1] 单体裂解为相对分子量为170 × 10 和140 × 10 的两个片段 。 ADAMTS13活性的变化与多种生理病理状态下相关，ADAMTS13活性的缺乏，系血栓 性血小板减少性紫癜（TTP ）发病的主要机制，也是诊断TTP 的重要标准。ADAMTS13抗原 及活性在不同年龄正常人群的分布情况，及其与性别的关系，国内外研究资料甚少，国外仅 有文献报道ADAMTS13活性与年龄的关系[2] 。本文旨在研究ADAMTS13与年龄及性别的关 系，为临床疾病的判断提供依据。 1. 对象及方法 1.1 研究对象 健康体检者共 87 例，年龄l6～78岁，平均年龄(45.3±21.4)岁；男性44例，年龄16～78 岁，平均(45.0±21.6)岁；女性43例，年龄l7～75岁，平均年龄(42.6±21.2) 岁，均无血栓性疾 病史。正常人混合血浆取自40例献血员。 1.2方法 1.2.1 血样标本采集和保存: 取静脉血, 使用 0.129mol/L 的枸橼酸钠抗凝，采集后均 3000rpm 离心 5 分钟，分离血浆， 分装后冻存-30℃备用。 1.2.2 ADAMTS13 活性的测定[3] 应用 Frets-VWF73 试剂盒（购自日本 Peptide Institute ）检测ADAMTS13 的活性。根据 试剂盒使用说明进行操作，使用前依次加入 37µl DMSO 和 117µl 水溶解荧光标记的 ADAMTS13 底物 Frets-VWF73 ，用反应缓冲液（5 mM Bis-Tris, 25mM CaCl2, 0.05%Tween-20, 1本课题得到国家自然科学基金资助项目） 教育部博士点基金（k5122501 ） 苏州大学附属第一 医院血液学“135 工程”重点学科开放课题基金（135XY0406）的资助。 - 1 - pH 6.0 ）稀释正常人混合血浆和待测样本（1:25 稀释），加入 96 孔板，每孔 100 µl，随后每 孔再加入 100µl 的底物（终浓度为2 µM ）。检测荧光，连续检测１h,每 5 分钟测一次。以不 同比例稀释的正常人混合血浆作标准曲线，计算待测样品ADAMTS13 的活性水平。 1.2.3 ADAMTS13抗原的测定[4] 用三抗体夹心 ELISA 法（试剂盒由比利时 Leuven 大学