Smoothened表达对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞RhoAROCK通路的影响.pdfVIP

·68· 中华临床医师杂志f电子版)2014年 2月第 8卷第 4期 ChinJClimcians(ElectronicEdition)．February15．2014．V01．8．No．4 ● 基础 论 著 ● Smoothened表达对类风湿关节炎成纤维样 滑膜细胞 RhoA／ROCK通路的影响 彭蔚湘 朱尚玲 冯晓雪 林灼锋 黄建林 【摘要】 目的 初步探讨 SonicHedgehog(Shh)信号通路分子 Smoothened(Smo)对类风湿 关节炎(RA)成纤维滑膜细胞(FLS)RhoA／ROCK通路相关分子的影响。方法 收集病情活动 (DAS28 ≥3．2)RA 患者关节镜手术或关节置换术切除的滑膜组织，组织块培养法培养 RA-FLS作为细胞模 型，流式细胞术检测CD55阳性率鉴定细胞，然后分别予Smo分子激动剂Purmorphamine或抑制剂 KAAD—Cyclopamine处理，应用GST-pulldown法检测RhoA活性，Westernblot检测ROCK活性与 Smo蛋白表达。结果 与对照组相比，RA-FLS经Purmorphamine刺激后，活性RhoA蛋白、磷酸化 MYPT1蛋白及 Smo蛋白均上调 (P0．05)；经KAA ,Cyclopamine处理后，活性RhoA蛋白、磷 酸化MYPT1蛋白及Smo蛋白均下调 (P0．05)。结论 RA．FLSSmo表达可影响RhoAR／OCK信 号的传导。Smo可能参与了RA．FLS中Shh信号通路非经典途径的调控。 【关键词】 关节炎，类风湿； Smoothened； 成纤维样滑膜细胞； RhoA／ROCK信号通路 Influence of of Smoothened molecular expression on RhoAfROCK signaling pathway in flbroblast-likesynoviocytesfrom rheumatoidarthritis PengWeixiang,ZhuShangling,FengXiaoxue LinZhuofeng,Huangdianlin．DepartmentofRheumatology,theThirdAffiliatedHospitalofSunYat-sen University,Guangzhou510630,China Correspondingauthor：HuangJianlin,Email．jianlin _ h@163．com [Abstract] Objective ByinvestigatinghteexpressionofSonicHedgehogsignalingpathway． associatedfactorSmoohtened (Smo)offibroblast-likesynoviocytesfrom activerheumatoidarthritis (RA-FLS)and itseffecton RhoAR／OCK singalingpahtway,tostudy血eregulation ofSmoin u non-canonicalHhpathway．Methods n他synovialtissuewhichwastaken台oI矗,~ e ofRA patients rgry , wasmechanically separated nad used to establish hte cellmodelofprimary＼ RA· FLS by using explants—culture．Furthermore，fibroblasts’cellpurityWas identifiedbyt