两亲荧光探针与氨基酸的荧光光谱.pdfVIP

维普资讯 第 24卷，第 3期 光 谱 实 验 室 Vo1．24。NO．3 2007年 5月 ChineseJournalofSpectroscopyI以b m M ay ， 2 0 0 7 两亲荧光探针与氨基酸的荧光光谱 邹欣平① 周兴旺 袁汇娟 钟立群 程银芳 (湖北师范学院化学与环境工程系 湖北省黄石市 435002) 摘 要 用自行设计合成的两亲荧光探针探讨了与色氨酸．酪氨酸两种体系在不同条件下的荧光性 质。实验结果表明 ；在 pH=7．3的缓冲溶液体系中相对荧光强度最大f得出两亲荧光探针与色氨酸、两亲荧 光探针与酪氨酸发生相互作用且体系稳定 ；为研究和了解两亲荧光探针与生物大分子作用的化学本质提 供了一定的依据。 关键词 两亲荧光探针．色氨酸．酪氨酸 ．荧光强度．荧光分析。 中图分类号：0657．32 文献标识码：A 文章编号 ：1004-8138(2007)03-0380-04 1 前言 由于荧光探针在生命科学和化学过程中重要作用，而且对生物学和环境检测中具有选择识别 的化学研究而展现出广泛的应用前景。两亲高分子聚合物 (以下简称荧光探针)是 由武汉大学化学 与分子科学学院自行设计和合成叫。荧光探针结构中含芘基和酰胺基，因此既具有亲脂性能，又具 有荧光响应基团，其分子量为39000，结构式如下； 荧光探针能够能溶人细胞，与细胞膜上和膜内的特定结构的多肽或蛋白质作用，通过发出荧光 信号响应来进行识别，将识别信息转换为荧光基团的改变，如荧光增强或减弱、光谱移动、荧光寿命 变化等，实现多肽或蛋白质的检测。生物大分子蛋白质的分析要进行细胞破碎和分离，蛋白质水解、 超声等会影响蛋 白质或产物的结构和功能；或者使其变性，一级二级结构折叠发生变化；氨基酸是 蛋白质水解的产物，要分析蛋白质的结构，首先要对蛋白质中的氨基酸进行分析，氨基酸直接分析 ① 联系人．手机l(oE—mail：hscommunicution~sina．corn — 作者简介：邹欣平(1953一)．女．湖北省随州市人。高级实验师．从事有机化合物的光谱学的研究和应用。 收稿 日期t2007-01-17；接受 日期t2007—02—07 维普资讯 第 3期 邹欣平等：两亲荧光探针与氨基酸的荧光光谱 法无需对其进行衍生化，可直接进行分析测定。近年来有报道不经分离直接测定的方法：如荧光光 谱偏最d,--乘法、偏振荧光光谱法、同步荧光法、一阶导数法等。 荧光探针已经应用于环境阴离子污染物监控、医学上有害阴离子的检测等方面，将此荧光探针 直接应用于识别细胞内特定氨基酸的文献报道不多。本文用荧光分析法分别研究了荧光探针与色 氨酸、酪氨酸体系在不同实验条件下对其荧光性质的影响，为今后深入研究该荧光探针与生物蛋 白 质大分子相互作用打下了一定的基础。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 97OCRT型荧光分光光度计(上海分析仪器总厂)，AG245型电子分析天平 (瑞士梅特立公司)， 三 星冰箱；两亲荧光探针(分子量 39000)(武汉大学化学与分子科学学院)；色氨酸 (Try)，酪氨酸 (Tyr)[中国医药 (集 团)上海化学试剂公司]；荧光探针储备液的配制：称取一定量的荧光探针，用 二次纯水定容为 100ml，摇 匀，得浓度为 1×10_。mol／l的溶液，置于 1—4C冰箱中保存； NaliPO一NaOH缓冲溶液；Britton—Robinson缓冲溶液；所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸 馏水，经检验均无荧光本底值 。 2．2 实验方法 移取～定量 1×10～mol／l的荧光探针溶液和一定量色氨酸溶液、酪氨酸溶液分别置于3支 lOm1．具塞比色管中，以二次蒸馏水定容至刻度，摇匀，室温条件下，在荧光光度计上以 lcm石英比 色皿，狭缝宽为 ExlEm=10nm