包菜中 甲萘威含量的测定.docVIP

包菜中甲萘威的测定 一、实验目的 1、了解甲萘威的作用与危害，以及测定甲萘威的方法 2、熟悉荧光法测定甲萘威的步骤 3、学会使用分光光度计 二、实验原理 甲萘威，化学名为1-萘基-N-甲基氨基甲酸酯，是一种氨基甲酸酯类杀虫剂农药。这类杀虫剂的大量使用，造成了不同程度的污染，特别是与人们的生活息息相关的粮食、蔬菜等，因此对其残留物的监测显得非常重要。对甲萘威等氨基甲酸酯类农药的检测方法主要有HPLC、GC—MS、TLC以及免疫检测和生物传感器等。目前国内常用的农药残留分析方法都存在样品前处理过程繁琐、消耗试剂、耗时长等缺点。本文根据甲萘威的荧光特性，用紫外荧光法对甲萘威农药进行检测和定量分析，利用合适波长的紫外激发光照射甲萘威溶液，通过测量甲萘威吸收紫外光后发出荧光强度来检测甲萘威浓度。 部分物质分子吸收了紫外和可见区电磁辐射后，它的电子能跃迁至激发态，然后以热能的形式将这一部分能量释放出来，本身又恢复到基态。当用一种波长的光(如紫外光)照射某种物质时，该物质会在极短的时间内，发射出较照射光波长为长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。对于荧光来说，当激发光停止照射后，发光过程几乎立即 (10-9～10-6s)停止。 由于物质分子结构不同，所吸收光的波长和发射的荧光波长也有所不同。利用这个特性，可以定性鉴别物质。同一种分子结构的物质，用同一波长的激发光照射，可发射相同波长的荧光。若该物质的浓度不同，则浓度大时，所发射的荧光强度亦强，利用这个性质可以进行定量测定。用荧光进行定性、定量分析的方法称为荧光分析法，亦称为荧光分光光度法。 根据郎伯比尔定律知，物质的荧光强度与被测物质的吸光程度和荧光效率有关．当溶液的浓度很稀时，荧光强度与浓度的关系式为：F=2．303φI0εcL≤0．05（φ-物质的荧光效率；I0-激发光强度；ε-摩尔吸收系数；c-样品的浓度；L-样品的光程差） 对于一定的荧光反应，荧光效率φ一定，激发光强和溶液厚度(光程差)L一定时，则有2．303φI0εL=K为常数，则有F=Kc，这说明物质浓度很稀时，荧光的强度与该溶液的浓度成正比。因此，只要测得物质的荧光强度，就可以算出物质的浓度，它是荧光定量分析的理论基础。 三、仪器与试剂 仪器：RF-5301PC(岛津)荧光分光光度计；石英比色皿；100ml容量瓶1个；25ml容量瓶5个；10ml吸管1支，表面皿1个；50ml烧杯2个；玻璃杯1根；漏斗1个；10ml量筒1个；滤纸1张；移液管（1ml、5ml）各1支 试剂与试样：甲萘威标准液（100μg/ml）；95%甲醇；包菜 四、实验步骤 试样中甲萘威含量的测定 1）绘制激发光谱和荧光光谱 取3个25ml容量瓶，分别加入100μg/ml甲萘威标准溶液0.25ml、2.5ml,用95%甲醇稀释至刻度，摇匀。从装有0.25ml的标准液中吸取2.5ml于25ml容量瓶中稀释至刻度，摇匀。分别测一下激发光谱和荧光光谱，找出最佳的激发光谱和荧光光谱（浓度为0.1μg/ml的标样）。 此仪器采用450W氙灯作为光源，选取的激发和发射狭缝为3 nm，△λ =lnm。通过230nm～450nm波段进行扫描，确定最佳激发波长335nm左右，最佳荧光发射波长为278nm左右。 绘制标准曲线 大概测一下包菜试样的荧光强度，配制一系列标准溶液，使试样的荧光强度落在标准溶液曲线中间（本实验测的的试样的荧光强度大约是0.30左右） 移取2.5ml100100μg/ml甲萘威标准溶液于100ml容量瓶中，甲醇定容。从定容好的溶液中分别移取2.5ml，5.0ml，7.5ml，10.0ml，12.5ml溶液于5个25ml容量瓶瓶中，甲醇定容。固定λex =278nm，λem =335nm，激发和发射狭缝为3.0 nm测定系列标准溶液的荧光强度 包菜样品的测量 以含有甲萘威的包菜为样品，将其切成碎片、放置充分搅拌均匀，称取5g置与烧杯加入15ml甲醇溶液放置30min，提取并过滤，再用甲醇淋洗3次，放入25ml的容量瓶定容，测定其荧光强度。 1.依次打开仪器主机、计算机、打印机。 2.双击电脑桌面上的菜单“RFPC国标”，跳出Initialization的界面，仪器开始自检，在跳出的菜单栏上点击“Acquire Mode”并选择“Spectrum”，由此点击右下角的国标“Search λ”，波长搜索的对话框出现，分别在“EX Range”和“EM Range”中输入搜索范围并点击“Search”，开始搜索最佳激发波长与最佳发射波长。 3.激发光谱与荧光光谱图的绘制——搜索完毕，点击“Configure”菜单中的“Parameters”，此时“Spectrum Parameters”对话框出现。“Spectrum Type”中选择“E