包涵体蛋白的层析复性技术研究进展.pdfVIP

维普资讯 生物技术通报 · 技 术 与 方 法 · BJO晒 C日N0】 Gl， BULLET／N 2006年第 2期 包涵体蛋白的层析复性技术研究进展 高飞 范清林 邹文艺 宋礼华。 (安徽大学生命科学院，合肥 23oo39I安徽安科生物工程股份有限公司，合肥 230088#安徽省生物研究所，合肥 230088) 摘 要： 包涵体蛋白的复性是生物工程下游技术中的一个重要难题。层析法用于蛋白质复性是一种较新 的、适用于大多数蛋 白的方法。其原理是将层析技术应用于蛋 白质复性和纯化，使变性蛋 白质在层析柱上重折叠 为正确的空间构象，在洗脱的同时实现部分纯化。本文详细介绍 了蛋 白质在 5种层析柱上的复性方法、原理、应用 厦研究的新进展，为层析法对蛋白质复性的进一步应用提供依据。 关键词 ： 包涵体 蛋 白质复性 层析复性 重折叠 ProgressinRenaturationofInclusionBodyProteinsby ChromatographicProcedures GaoFei FanQinglin。 ZouWenyi。 SongLihua。 (Schoolofli science，AnhuiUniversity，Hefei230039，China# AnkebiotechnologyCo．，LTD，Hef,i230088，ChinaI BiologyInstituteofAnhuiProvince，Hefei230088) Abstract： Inclusionbodyproteinrenaturationisaimportantprocedureinthebiotechnology．Proteinrefolding bychromatographyisanewanduniversaltechnology．Theunfoldedproteincorrectlyrefoldedtothenativeconfor— mationthroughthecolumn，andwaspartlypurifiedduringtheelutionprocess．Themethod，principle，recentde— velopmentforrenaturationofproteinsbyfivekindsofchromatography，hydrophobicinteractionchromatography， ionexchangechromatography，sizeexclusionchromatography，affinitychromatographyandexpandedbedadsorption chromatographywereintroducedindetails．Thenew methodmaybeusedforresearchingtherenaturationofpro— teinsinpreparative，eveninproductivescalesinindustry． Keywords： Inclusionbody Proteinrenaturation Chromatographyrenaturation Refolding 在原核细胞表达外源基因，尤其是以大肠杆菌 生产过程的关键。 为宿主菌高效表达外源基因时，表达蛋 白常常在细 在实验室中少量蛋 白需要复性时，一般采用传 胞质内聚集，形成包涵体(inclusionbody)。以包涵 统的稀释和透析复性，复性时蛋 白质初浓度为 10～ 体形式存在的蛋白质分子不具有正确的天然三维结 100t~g／ml或更低，但工业上采用此复性方法需要 构，表达蛋 白不具有生物活性，因