Forskolin激活cAMP信号通路调控小鼠心肌成纤维细胞结缔组织生长因子的表达.pdfVIP

第 44卷第 1期第 1页 华 中科技大学学报(医学版) Vo1．44 No．1 P．1 l、_．； 2015年 2月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Feb． 2015 一论 一 - - ◆ ◆ ◆- +- ◆ ◆ 一著 一 、+；-、 Forskolin激活 cAMP信号通路调控小鼠心肌 成纤维细胞结缔组织生长因子的表达* 刘 波， 黄晓帆， 李冬寒 ， 王生伟 ， 杜心灵△ 华 中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科 ，武汉 430022 摘要 ：目的 研究胞 内环磷酸腺苷 (cAMP)水平提高对小 鼠心肌成纤维细胞 (MCFs)表达结缔组织生长 因子 (CT GF)的影响及其信号通路 。方法 采用出生 1周 内C57BL乳 鼠心脏分离培养原代 MCFs，第 3代 MCFs使用腺苷酸环 化酶激活剂Forskolin干预培养后检测细胞 CTGF、蛋 白激酶 A(PKA)、p44／42丝裂素活化蛋 白激酶(MAPK)及磷酸化 p44／42MAPK表达情况。分别给予磷酸化 p44／42MAPK抑制剂 PD98509及 PKA抑制剂 Rp—cAMPS阻断相关信号 节点，检测细胞内PKA、p44／42MAPK、磷酸化 p44／42MAPK 以及 CTGF表达变化 。结果 Forskolin干预培养 MCFs 细胞后 ，胞 内cAMP水平提高 ，细胞活力下 降，PKA表达上升 ，p44／42MAPK总蛋 白无明显改变 ，p44／42MAPK磷酸化 水平下降，CTGFmRNA及蛋 白表达下降；给予 PD985o9抑制 p44／42MAPK磷酸化后 ，PKA表达上升，CTGFmRNA 及蛋 白表达下调 ；Rp—cAMPS抑制 PKA活化后 ，p44／42MAPK磷酸化水平升高，CTGFmRNA及蛋 白表达上调 。结论 Forskolin可以通过提高MCFs胞 内cAMP水平抑制CTGF的表达，其作用信号通路为高水平 cAMP上调PKA表达，降 低下游 p44／42MAPK磷酸化水平 ，抑制 CTGF的表达 。 关键词 ：Forskolin； 环磷酸腺苷 ； 结缔组织生长 因子 ； 心肌成纤维细胞 ； 心肌纤维化 中图分类号 ：R542．2 DoI：1o．3870／j．issn．1672-0741．2015．01．001 ForskolinRegulatestheExpressionofCTGF in MouseCardiacFibroblasts byActivatingthecAM P SignalingPathway LiuBo，HuangXiaofan，LiDonghanetal DepartmentofCardiovascularSurgery，UnionHospital，TongjiMedicalCollege， HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430022，China Abstraet Obiective Toexaminetheeffectsoftheincreased1evelsofcyclicadenosinemonoph0sphate(cAMP)ontheex～ pressionofconnectivetissuegrowthfactor(CTGF)inmousecardiacfibroblasts(MCFs)andtherelatedsignaltransductionpath～ way．Methods MCFsfrom theheartsof1一week—oldC57BL micewereisolatedandprimarilycultured．Theexpression levelsof CTGF，proteinkinaseA(