2015桂林医学院科学实验中心流式细胞仪使用说明.docVIP

桂林医学院科学实验中心流式细胞仪使用说明 一、仪器设备介绍 1. 仪器特点：本平台现有机型为美国BD公司的BD FACSAria III，具有检测分析功能及分选功能。仪器配有两种激光光源，波长分别为488nm、633nm，可检测七种荧光。主要用于各种样品的分析和各种细胞的无菌分选(分选的使用，请参照三，分选使用规程)。 2. 主要用途：细胞表型分析、细胞增殖及细胞周期、细胞凋亡及凋亡信号传导、细胞功能检测、细胞间的相互作用、基因转染、染色体核型分析、细胞分选等。 3. 开放时间：工作日周一至周五上班时间开放，上午11:20、下午16:50（冬春季）或17:20（夏秋季）后为仪器清洗和处理数据时间，停止接样。 二、使用须知 1. 预约 仪器使用必须提前预约，无预约恕不接待，实验者请在工作时间内提前一周预约（分选实验需要提前两周预约），具体实验时间由平台与预约人商定。预约成功后，请准时按照预约时间上机检测样品，否则取消检测。若取消预约请至少提前三天通知，以便提高仪器的使用效率。如果预约后无故不进行实验，我们将视情况停止对该实验者及所在实验室的预约服务。 预约时请说明：姓名，联系方式，E-mail，预约日期，实验名称，样品数目，样品荧光参数，检测指标，结果展示图（如果对检测的样品的荧光参数或结果展示图不了解，请先携带试剂说明书以及相关文献资料与我们平台技术老师讨论，以确保我们的设备能够为您提供服务）。 2. 实验注意事项： a. 由于流式细胞术属于灵敏性较高的实验检测手段，样本准备过程中的微小误差，极有可能造成实验结果的不可重复性，因此，需要实验者严格按照实验要求和步骤进行，必要时需先摸索相关实验条件，建立适合自己的实验操作体系后再进行正式实验。 b. 如果您是第一次做相关实验，由于流式细胞术涉及的试剂和耗材以及实验样品都比较昂贵，为了节省您的时间和减少经济损失，我们建议首次使用请至少提前两周与本平台技术老师预约讨论实验的实施方案，先做预实验，再做正式实验。 c. 对照设置：流式细胞术的结果分析主要以对照为参考值，因此对照的好坏，是否齐全，决定了整个实验过程的成败和实验结果的可信度。如果对对照样本的设定有疑问请咨询本平台技术老师，我们共同讨论。 d. 本平台不提供任何实验操作流程，请预约者自备，若对所要进行的实验流程有不明白之处，可以咨询本平台技术老师，我们共同讨论。 e. 实验结束后请实验者整理实验台面、物归原位、移液器量程调至最大值。 3. 样品上机要求： a. 供流式分析的样品是单细胞悬浮液，样品浓度调至1-10 X 106 cells/ml，浓度过高或过低都会对检测结果造成一定的影响，一般实验只需0.2-0.5 ml上述浓度的样品即可。 b. 上机前务必去除样品中的细胞团块，防止管路堵塞，样品必需预先使用附滤网BD FALCON试管 (Cat. No.352235) 过滤细胞，或使用35-55 μm的尼龙筛网（本室提供）将细胞过滤至BD FALCON 352008 试管中（请自行准备上样管）。若未过滤样品即上机而引起机器堵塞及损坏，需负赔偿责任。 4. 结果分析： a. 检测结果是否符合实验者预期不在我们服务范围内，我们只对所检测样本 的实验结果负责，保证实验结果真实可信。结果分析以对照为依据，不以实验者 假设或预期为依据，请理解！ b. 请在实验前说明需要的结果图，我们不接待二次要求，不会受理第二次要 求重新处理数据、出报告，请配合！ c. 因电脑内存有限，我们会定期清理数据，所以实验者收到结果报告后请妥 善保存，否则无法弥补，请理解！ 三、流式细胞分选操作规程 1. 分选准备 使用者可根据需要使用各种不同的实验流程，如抗体荧光标的标定(antibody labeling)或荧光基因转染(transfection)。上机前必须完成下列程序： a. 细胞浓度应保证在1-2x107个cells /ml。样品必需预先使用附滤网BD FALCON试管 (Cat. No.352235) 或35-55 μm的尼龙筛网将细胞过滤。若未过滤样品即上机而引起机器堵塞及损坏，需负赔偿责任。 b. 如细胞分选后需再次培养（无菌分选），请准备含合适培养液的收集管，分选前交操作员。建议在5 ml收集管中加入 2ml含有抗生素的培养基当细胞分选时的垫底液。 c. 若欲分选GFP、DsRed等单色基因转染的样品，需提供未经转染的相同细胞为控制组标本，以作为分选前机器校正用。若以多种荧光染色进行分选，需提供各种单一荧光染色的标本作为分选前仪器校正用。 d. 本服务项目以无菌分选为主，希望保证所提供样品的无菌性，不接受感染性样本的检测和分析。 2. 注意事项： a. 预约申请: 提前两周在工作日时间内预约实验，请提前一天预约实验具