血啉甲醚对单增李斯特菌的光动力灭活作用及机理.pdfVIP

血啉甲醚对单增李斯特菌的光动力灭活作用及机理 林少玲 ，唐书泽 ，唐妹妹 ，吴希阳 ，陈振强 1(暨南大学食品科学与工程系，广东 广州，510632) 2(暨南大学光电工程系，广东 广卅I，510632) 摘 要 通过平板菌落计数法研究血啉甲醚对单增李斯特菌的光动力灭活作用，同时采用聚丙烯酰胺凝胶 电泳 和聚合酶链式反应分析光动力灭菌技术对单增李斯特菌蛋 白降解效果和基 因组DNA的损伤程度。实验发现浓 度为 25 g／mL的血啉甲醚在光功密度为200mW／cm 的溴钨灯光照射 30min杀灭了99．9999％的单增李斯特 菌，并导致了其蛋 白质降解和基因组DNA片段断裂。血啉甲醚对单增李斯特菌的光动力灭活作用非常显著，其 灭活机理可能是通过对蛋 白质降解和基 因组 DNA损伤实现 的。 关键词 血啉 甲醚 ，光动力灭菌技术 ，单增李斯特菌，蛋 白质降解，脱氧核糖核酸损伤 光动力技术是指生物组织 中的光敏物质受到相 病致死率高达 25％以上 。随着我 国肉类消费大 应波长光照后 ，吸收光子能量 ，由基态跃迁到激发态 ， 幅增加 ，尤其是对冷鲜 肉食品的消费，呈迅速上升趋 并迅速退激释放能量而返 回基态的过程 。该过程能 势，肉类食品单增李斯特菌污染导致的潜在食物中毒 够生成大量活性氧，活性氧与多种生物大分子相互作 将更加受到关注。本实验选用单增李斯特菌为实验 用 ，从而损伤细胞结构或影响细胞功能 。在医学 菌株 ，研究血 啉 甲醚 (hematoporyrinmonomethyle． 上 ，利用光动力反应进行疾病诊断和治疗 的技术称之 ther，HMME)作为光敏剂对单增李斯特菌 的APDT 为光动力疗法 (photodynamictherapy，PDT)，目前主 灭活效果 ，并利用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (sodiumdode． 要用于恶性肿瘤和皮肤癌 的治疗 ，在血液制品消 cylsulphate polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS— 毒等方面的作用也得到了广泛认同，其安全性也得到 PAGE)和聚合酶链式反应 (polymerasechainreaction。 了较为详尽的论证 。 PCR)技术分析 HMME对单增李斯特菌菌体蛋 白和 光 动力灭 菌技术 (anti—microbialphotodynamic 基因组 DNA的光动力影响，探讨光动力灭菌技术的 technology，APDT)是在光动力技术的基础上 ，利用光 作用机理。 敏剂对细菌的优先聚集特性 ，在适 当波长 的光激发 下，使光敏剂吸收能量后产生单线态氧、自由基等活 1 材料和方法 性氧物质进而通过氧化作用杀伤微生物，而不伤害周 1．1 材料 围组织和细胞的一项新技术 。抗生素是 目前抑制 1．1．1 菌株 或杀灭病原微生物的主要手段 ，但近年来随着抗生素 单增李斯特菌 ，广州市疾病预防控制中心。 滥用导致 了诸如 “超级细菌 ”爆发等事件 的不断出 1．1．2 培养基 现 ，使人们开始寻找抗生素之外有效且安全的抑菌或 细菌计数培养基和胰蛋 白胨大豆 肉汤培养基 杀菌方法 。APDT已被证实具有显著 的杀伤耐药 (tryptonesoybroth，TSB)，青岛海博生物技术有限公 菌的作用 ，本课题组前期研究 已证实其对 曲霉孢 司。 子 、金黄色葡萄球菌 ¨。。、蜡样芽胞杆菌和大肠杆