高效表达淀粉酶的工业酿酒酵母菌株的构建.pdfVIP

食品与发酵工业 #$%#!’(%)$)*%+%#,-)’*- ! 高效表达淀粉酶的工业酿酒酵母菌株的构建 ! ! ! 刘增然 李树立 张光一 刘世贵 （河北经贸大学生物科学与工程学院，石家庄， ） （四川大学生命科学院，成都， ） ! #$##%! %!##! 摘 要 将 扩增的扣囊腹膜孢酵母菌淀粉酶基因，与磷酸甘油酸激酶基因 启动子和 分 ’() ! !* 泌序列一起插入含 的酵母穿梭质粒 ，构建酵母菌重组表达质粒并命名为 。用 + ,- /$ 012! . . 醋酸锂转化法转化工业酿酒酵母 ，转化子培养上清液的淀粉酶活性为 ／ ， 的淀 34*!% %526 +0 %7 粉被降解， 检测到约 的蛋白条带。转化子在非选择条件下的遗传稳定性为 383*’19- $$:; 27。 关键词 淀粉酶基因，克隆和表达，酿酒酵母工程菌，分泌序列 淀粉是植物储存碳水化合物的主要形式， 插入外源 分泌序列，与磷酸甘油酸激酶基因 !* 但酿酒酵母菌不能表达分解淀粉糖的酶。在酿 （ ）启动子一起构建多拷贝酵母表达质 !!#! 酒工业和焙烤工业，利用淀粉类物质生产工业 粒，使转化子可以有效分泌淀粉酶而利用淀 和燃料乙醇需要 步完成，（） 淀粉酶液化 粉，并对转化子遗传稳定性和发酵液的淀粉利 / ! !* 淀粉类物质，（）液化淀粉被糖化为酿酒酵母 用率进行了测定。 可利用的糖，（）酿酒酵母的糖发酵。但外加 / ! 材料与方法 酶易引起过敏症状，并使工业制品的生产成本 提高。构建分泌 淀粉酶的酿酒酵母工程菌用 !! 菌株和质粒 !* 于酿造工业、焙烤工业及麦芽糖生产和单细胞 大肠杆菌（ ） 为本实验室保 $5%’( 8F$! 蛋白生产可以解决这些问题。许多研究者将各 存，酿酒酵母（ ）工业菌株 )5%*+*,(-(.* 34*!% 种来源的淀粉酶基因引入酿酒酵母，其淀粉转 由地方酒厂提供。质粒 、 ,- /$ G(AA!