NT4p53（C22）Ant融合基因重组腺病毒的构建及对肝癌细胞的杀伤作用.pdfVIP

第36卷第2期 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo1．36NO．2 2015年 3月 JournalofXi’anJiaotongUniversity(MedicalSciences) M ar．2O15 ◇基础研究◇ NT4p53(C22)Ant融合基因重组腺病毒的构建 及对肝癌细胞的杀伤作用 周 琦，尚 旭，许永波，姜 珏 ，王 华，李 苗 (西安交通大学医学部第二附属医院超声研究室，陕西西安 710004) 摘要 ：目的 构建编码融合基因NT4p53(C22)Ant嵌合肽的重组腺病毒表达载体 ，并研究其对人肝癌 HepG2细胞 的 杀伤作用 。方法 使用分子克隆技术 ，通过 同源重组获得重组腺病毒 rAVV—NT4p53(C22)Ant，收集上清、大量扩增 并测定其滴度。感染人肝癌 HepG2细胞，采用免疫组化法检测 p53表达，MTT实验、流式细胞仪观察 rAAv_ NT4p53(C22)Ant对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 成功构建重组腺病毒表达载体，感染人肝癌HepG2细胞后 p53表 达率为(44．88±2．45) ；MTT检测显示 ，细胞存活率随作用时间延长明显降低，与空病毒组及对照组比较差异均有 统计学意义(Po．05)，流式细胞仪检测显示 G。／G 期细胞 比例及凋亡细胞较空病毒组及对照组增加 。结论 构建 的NT4p53(C22)Ant重组腺病毒在肝癌细胞 中能有效表达 ，对肝癌 HepG2细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用 。 关键词 ：NT4p53(C22)Ant；重组腺病毒 ；肿瘤 ；基 因治疗 中图分类号 ：R735 文献标志码 ：A D0I：10．7652／jdyxb201502003 Constructionofrecombinantadenovirusharboringfusiongene NT4p53(C22)AntanditskillingeffectOilHepG2tumorcells ZHOU Qi，SHANG Xu，XU Yong—bo，JIANG Jue，WANG Hua，LIM iao (DepartmentofM edicalUltrasound，theSecondAffiliatedHospital， Xi’anJiaotongUniversityHealthScienceCenter，Xi’an710004，China) ABSTRACT．Objective ToconstructarecombinantadenovirusvectorharboringfusiongeneNT4p53(c22)Ant andstudyitskillingeffecton HepG2tumorcells．Methods Usingmolecularcloningtechnology，therAVV— NT4p53(C22)Antwasproducedbyhomologousrecombination．Thenwecollectedvirussupernatantandmeasuredits titerafteritwasamplified by PCR．TheeffectofthisfusiongeneonHepG2tumorcellswasevaluated by IHC， MTT assay。PIstainingandflow cytometry．Results Therecombinantadenoviruswassuccessfullyconstructed． Thep53expressionrateinrAAV—NT4p53(C22)Antgroup was (44．88±2．45)％ ．MTT assayshowedthatrAAV— NT4p53(C22)Antcouldstronglysuppressthegrowth ofHepG2 tum