组织工程骨的牛血清白蛋白残余量检测.pdfVIP

· JournalofTissueEngineeringandReconstructiveSurgery，Feburary2015，Vo1．11No1 6 · ． 论 著 · doi：10．3969~．issn．1673-0364．2015．01．002 组织工程骨的牛血清 白蛋白残余量检测 邹文焘 刘广鹏 摘【要】 目的 检测体外构建的组织工程骨 中的牛血清白蛋 白(Bovineserumalbumin，BSA)残余量 ，并探讨减少残余 量的方法 方法 体外分离培养 hBMSCs，将第 2代细胞消化、离心、洗涤 3次，获取细胞洗涤液样品。取第 2代hBMSCs 接种于 B—TCP支架材料 ，体外成骨诱导 2周 ，构建组织工程骨 。生理盐水浸洗 3次 ，获取洗涤液样品。然后加入PBS， 37℃振荡浸提 24h．获取浸提液样品 同法获取未接种细胞的单纯支架材料的浸提液样品作为对照 。采用酶联免疫法 检测洗涤液与组织工程骨样品浸提液 中BSA的残余量 ，观察洗涤次数与洗涤液 中BSA含量 的变化关系。结果 随洗 涤次数增多，洗涤液与浸提液 中的BSA含量明显降低。酶联免疫法测定的组织工程骨与单纯支架材料浸提液 中BSA 残余量分别为(19．54_+6．70)ng和(15．67-+5．49)ng，单位重量的残余量分别为(0．656-+0．213)n咖 g和(0．796-+0．205)ngm／g， 两组无显著差异( 0．05)结论 酶联免疫法适用于组织工程骨中BSA残余量的检测 因为支架材料较细胞更易吸附 BSA．现有条件下构建的组织工程骨 BSA残余量仍然较高，需要进一步探索降低残余量的方法 。 【关键词】 牛血清 白蛋白 酶联免疫吸附测定 组织工程骨 残余量 【中图分类号】 Q813．1+2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1673—0364(2015)ol一0006—04 QuantitativeDetectionofResidualBSA inTissueEngineeredBone ZOUWentaoi，L1UGuangpen ．1Departmentof Otolaryngology；2OepartmentofPlasticandReconstructiveSurgery，ShanghaiTenthPeople Hospital，Tont~iUniversity， Shanghai200072，China．Correspondingauthor：LIUGuangpeng{E—mail：guangpengliu@163．com)． A【bstract】 Objective Todetecttheresidualbovineserum albumin (BSA)intissueengineeredboneconstructed conventionallyinvitrobyB—TCPandtoinvestigatenew methodstoreduceit．n ethods Humanbonemarrow mesenehymal stem cells (BMSCs)wereisolatedandcuhuredinvitro．BMSCsofpassage2weredigested，aftereentrifugationandwashing， thewashingliquidofthecellswasobtained．AndBMSCsofpassage2wereinoculatedinB-TCPscaffoldsandinduced osteogenesisinvitrofor2 weekstoconstructtissueengineeredbone．Thetissueengineered bonewasrinsed insalinefor threetimes putinPBS bufferandextractedofr24hoursat37 oC toobtain theextractedliquor．The extractedliquorof scaffoldwithoutcellsinoculatedsimultaneouslywasse~edasthecontro1．ResidualBSA contentintheextractedliquorand thewashingliquidsam