ORF3基因缺失对猪圆环病毒Ⅱ型感染复制能力的影响.pdfVIP

　中 国 兽 医 学 报 　2 00 8 年 9 月 　第 28 卷 　第 9 期 　Chin J Vet ci 　 ep t . 20 08 　Vol . 2 8 　No . 9 　 199 O RF3 基因缺失对猪圆环病毒 Ⅱ型感染复制能力的影响 1 ,2 1 3 1 3 4 1 2 杨晓农 ,郭万柱 ,徐志文 ,王 　新 ,殷华平 ,王小玉 ,龙 　虎 　( 1. 四川农业大 学 动物生物技术中 心 ,四川 雅安 6250 14 ;2 . 西南民族大学 生命科学与技术 学院 , 四川 成都 6 1004 1 ;3 . 西北农林科 技大学 动物科 技学院 ,陕西 杨凌 7 12100 ;4 . 韶关学院 英东生物工程学 院 ,广东 韶关 5 1200 5) 摘要 :设计 1 对 特异性引物 A F2P1/ A F2P2 ,从疑似 PCV 2 感染的病料中扩增获得 1 7 67 bp 的 PCV2 全基因组(命名 为 PCV22CD) ,克 隆至 p MD182T imp le 载体构建重组质粒 p T 2PCV 22CD 。序列分析表明: PCV22CD 与 GenBan k 中公布的 12 个 PCV 2 毒株间的同源性高达 9 5 . 0 %～100 % 。用 Nco Ⅰ酶切 p T 2PCV22CD 获得 4 459 bp 线性 目的 DNA 片段 ,补平 CA T G 4 个碱基 、连接环化构建 O RF3 基因插入缺失重组质粒 p T 2PCV22CD2C 并测序 。用 ac Ⅱ 酶切 p T 2PCV22CD2C , 回收 1 771 bp 线性 目的片段 , 体外连接 环化 构建 了 ORF3 基 因缺 失突变毒株 mPCV 22C 。 ( ) PCR2RFL P 检测表明 ,在脂质体转染法转染 mPCV22C 、培养并盲传 4 代 的 IB R 22 细胞 中 PCV 1 阴性 ,特 异性检 测到 mPCV22C 的 DN A ; 电镜观察发现 ,在盲传 6 代的 IBR 22 细胞胞核内观察到突变 毒株 的病毒颗粒 。试验结果 表明 :ORF3 基因缺失 突变毒株 m PCV 22C 具有感 染性 , 能够在 IBR 22 细胞中复制增殖 , 证实 OR F3 基 因不是 PCV2 复制的必需基因 。 ( ) 关键词 :猪圆环病毒 Ⅱ型 PCV2 ;ORF3 基因 ;基因功能 中图分类号 : 85216 5 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 : 100 524 54 5( 2008) 0920991205 In fluence of O RF3 gen e delet ion on infect in g an d repl icat in g ab il it y of por cine cir ovir us t ype 2 YAN G Xi ao2non g1 ,2 , GU O Wa n2zh u1 3