产壳聚糖酶菌株发酵条件优化及壳聚糖酶的分离纯化研究.pdfVIP

产壳聚糖酶菌株发酵条件优化及壳聚糖酶的分离纯化研究 段 妍 ，韩宝芹2，董 文2，杨 艳2，常 菁2，刘万顺2 (1．中山大学 神经与认知科技创新平台，广东 广州 510080；2．中国海洋大学 海洋生命学院，山东 青岛 266003) 摘要：从土壤中筛选得到一株产壳聚糖酶菌株 P003，对其进行 了发酵条件优化。结果表明其最适发酵培 养条件为：(NH4)2s042．0‰ 粉末壳聚糖 1．00／01葡萄糖 0．10／01K2HPO40．07％，KH2PO40．03％，NaC10．5％， MgSO47H200．05％，酵母提取物O．3％，调pH至5．0；2．0％接种量，500mL三角瓶装液量为 150mL，32℃ 下150r／min摇床培养96h，在此条件下菌株发酵液的壳聚糖酶活力达 108u／mL。采用硫酸铵分级盐析、 离子交换层析和凝胶过滤层析等方法，从菌株的发酵液中分离出了分子质量为30．5ku的壳聚糖酶。 关键词：壳聚糖酶；发酵条件；分离纯化 中图分类号：Q814．1 文献标识码：A 文章编号：1000—3096(2009)01．0001—07 壳聚糖是几丁质脱去部分乙酰基的产物，具有 1材料和方法 良好的生物相容性、生物降解性、无毒性以及易成 1．1材料和试剂 膜性，因而在众多领域得到了广泛应用。但壳聚糖 1．1．1菌种 分子质量较大，水溶性差，在人体 内不易吸收，使 从土壤 中筛选得到一株产壳聚糖酶的细菌 其应用受到一定限制IJJ。 P003[12,131 。 壳寡糖是壳聚糖的降解产物，是聚合度为 2～20 1．1．2培养基 的低聚糖，具有水溶性好、易吸收等优点以及许多 种子培养基 ：蛋 白胨 0．5％，K2HPO40．07％， 独特的生理活性和功能l2，3】。如能提高机体免疫力、 KH2PO40．03％，葡萄糖 0．1％，酵母粉 0．3％，NaC1 抑制肿瘤细胞生长、活化增殖人体肠道 内双歧杆 0．5％，MgSO47·H200．05％，粉末壳聚糖 1．0％，pH 菌，同时还具有抗菌防腐l4J、保水保湿等功能，在 值为 6．3。 发酵基础培养基 ：(NH4)2SO41．0％，K2HPO4 医药、食品、化妆品等领域的应用前景备受瞩 目。 0．07％ ，KH2PO40．03％，NaC10．5％，MgSO4’7H20 壳寡糖的制备可分为化学降解法、物理降解法和酶 0．05％，葡萄糖 0．】％，酵母粉 0．3％，粉末壳聚糖 降解法6【，，与 目前常用的化学降解法相 比，酶法生 1．0％，pH值为 6．3。 产壳寡糖的反应条件温和易控，寡糖得率高、功能 1．1．3主要生化试剂 性更强，不易造成环境污染，是壳寡糖制备的主要 蛋 白电泳成套试剂购 自上海生物工程公司； 研究方向。因此，对壳聚糖酶的研究已成为几丁质 Q—SepharoseFastFlow 购 自 Amersham 公司 ； 和壳聚糖研究领域中较为活跃的分支之一。 Sephadex．G75为Pharmacia公司；粉末壳聚糖购 自 中国海洋大学海洋生物