产菊粉酶曲霉菌株的筛选和发酵条件的优化.pdfVIP

　科技动态 　产菊粉酶曲霉菌株的　　　　　　　 　　　　　　筛选和发酵条件的优化 　 1 1 2 3 3 3 1 唐艳斌 　许波 　唐湘华 　慕跃林 　杨云娟 　王晓燕 　黄遵锡 1. 云南师范大学生命科学学院　　　　　　　　　　　　　 2 . 云南师范大学生物能源持续开发利用教育部工程研究中心 3 . 云南师范大学酶工程重点实验室 　　　　　　　　　　　 　　70 年代以来 , 国外就开始研究菊粉酶 ,我国在 　　2) 初始液体发酵培养基 　麸皮 10 g/ L ,蛋白胨 这方面的研究起步较晚 。目前据国内外统计 ,产菊 20 g/ L , 菊粉 20 g/ L , 酵母 膏 4 g/ L , NaCl 5 g/ L , 粉酶的丝状真菌有 17 个属 40 余种 ,酵母菌 10 个属 K HPO 3 g/ L ,p H 自然 。 2 4 20 余种 ,细菌 12 个属 10 余种 ,其中大部分菌株产外 ) 3 初筛培养基 　菊粉 20 g/ L ,酵母膏 4 g/ L ,蛋 切酶 ,青霉和少数曲霉产内切酶 ,而该研究均停留于 白胨 5 g/ L ,K HPO 3 g/ L ,琼脂 20 g/ L ,p H 自然 。 2 4 实验室研究阶段 ,而且各菌株发酵获得的菊粉酶产 1. 2 　试验方法 量较低 ,生产成本高 。曲霉是 目前研究产菊粉酶的 1. 2 . 1 　酶活力测定方法 热点菌种之一 。国际上报道的曲霉菊粉酶最高产量 ( ) 3 ,5 - 二硝基水杨酸法 DNS 法 为 50 U/ mL ,而国内报道的曲霉菌株产菊粉酶的最 1. 2 . 2 　菌种筛选 高酶活力达到 53 U/ mL ,离工业化生产均有一定距 取一定量的菊芋土壤置于含有玻璃珠的无菌水 离 ,因此 ,进一步摸索菊粉酶高产发酵仍十分必要 。 三角瓶中 , 150 r/ min ,30 ℃振荡富集 24 h 。取一定 从菊芋周围的土壤筛选出产菊粉酶活力较高的 量液体按照不同稀释倍数加入以菊粉为唯一碳源的 曲霉菌株 ,并通过对该菌株实验室水平发酵工艺条 初筛培养基中 ,获得 6 株霉菌 ,经进一步摇瓶发酵确 件的优化 ,确定其最佳发酵条件 ,从而提高菌株的产 定产菊粉酶活力最高的曲霉菌株 。 酶活力 ,了解菊粉酶酶学性质基础 ,通过基因改良技 1. 2 . 3 　培养方法 术提高菌种的产酶能力 ,达到工业化生产要求 。 ) 1 斜面种子培养法 　挑 1 环菌体于斜面种子培 1 　材料与方法 养基中