伪狂犬病病毒Ea株TK--gE--gp63-突变株的构建及其生物学特性研究.pdfVIP

42卷3期 微 生 物 学 报 Vol42 No3 2002年6月 Ac缸舰r岫如蛔咖口舶曲4 June 2002 伪狂犬病病毒Ea株TK一／gE‘／gp63一突变株 的构建及其生物学特性研究。 刘正飞 陈焕春“ 何启盖 周复春 方六荣 农业部农业傲生物重点茧验室华中农业大学武汉430070 关t词：伪狂犬病病毒鄂A株，Ⅱ，旺。，I且cz+突变株，TK一／gE一，gp63一突变株．生物学特性 65 中圈分类号：s852 文献标识码：A 文章编号：00叭一6209《2002)03．0370·05 伪狂犬病病毒(P鸵udomb-esvima．PRv)属疱疹病毒科+具有在细胞培养物上快速生长、强烈的神经 嗜性与潜伏感染性等特性。本病毒可感染多种家畜和野生动物，对养猪业的经济损失最大。伪狂犬病 对养猪业的危害主要表现在：(1)母猪流产，产死胎、木乃伊胎．临床以产死胎为主。(2)新生仔猪大量死 亡．15日龄以内仔猪死亡率为100％。(3)断奶仔猪发病死亡，表现为拉稀，作划水样或转圈运动，口吐白 沫、阵挛性痉挛及强性痉挛和搔痒等症状。(4)引起种猪不育。公猪发生睾丸肿胀、萎缩，失去种用能 力。母猪表现为不发情、返情、屡配不孕等。(5)育肥猪表现为慢性呼吸道症状、增重迟缓、饲料报酬降 低、推迟上市的时间，少数病例出现神经症状死亡情况。 PRv基因组为线状双链DNA分子，大小约150kb。整个基因组由独特长区uL．独特短区us及位于 us两侧的末端重复序列TR和内部重复序列IR构成。PRv整个基因组至少含有70个基因．可编码70 ．100种蛋白质，其中毒力基因一直是PRv的研究热点之一。随着PRv丹于生物学的深入开展，胸苷激 酶TK、棱糖棱苷酸还原酶RR、蛋白激酶PK和蛋白丝氮酸，苏氨酸激酶s，T、碱性棱酶外切酶A州“、脱氧 尿苷三磷酸激酶(duTP船e)”】等酶类基因，gp63、gE、gc等糖蛋白基因均是PRv重要的毒力基因3。近年 来研究也表明．其它基因如EM、uul等也与PRV毒力有关14o。gp63、gE可形成二价复合体”’，二者的缺 失可大大降低毒力。糖蛋白基因如gE、gG、gc缺失后，疫苗免疫猪不产生针对所缺失糖白的抗体，结合 ELsL^和乳胶凝集试验(La忙xA羽“n“0nTest，LAT)”3可区分疫苗免疫猪和野毒感染猪，占L而淘汰野毒 感染猪．世界许多国家正是比此原理制定伪狂犬病的根除计划，目前宣布根除伪狂犬病的国家有英国、 莽兰、瑞典、捷克共和国等。在我国，2000年全国伪狂犬病普查结果表明，30％以上猪场有伪狂犬病感染 发病．给养猪业造成巨太的损失。因此，制定我国的伪狂犬病根除计划巳提上r日程，本研究以伪狂犬 病地方分商株PRvEa株为材料构建的1x一缺失株，构建了PRvEaTK一，gE一，I丑cZ+突变株。在此基础上， 又构建了PRvEaTK一，gE一，gp63一突变株，井通过运动试验对其生物学特性进行了研究。 l材料和方法 1．1试验材料 ’高等学校博士学科点专项科研基金责助项目和国家自然科学基盘贷助项目(39卯∞59 “通讯作者 作者简介：刘正飞(1973一)，男，湖北谷城人．博士，主要占L事病毒分于生物学研究。 收稿日期：2001_08—29．惨回日期：200l—12-ll 万方数据 3期 37 刘正飞等：伪狂犬病病毒Ea株TK／gE，gp63’突变株的构建及其生物学特性研究 穆载体。质粒pMDl8．T购自TaKaRa公司，PRvEa株由车室分离保存”1，PRvEaTK由本室构建”，籍肾 传代细胞PK．15由本室保存。 1．1．2酶和其它化学试