质粒DNA转化大肠杆菌实验.pptVIP

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2017-08-11 发布于安徽
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质粒DNA转化大肠杆菌实验.ppt

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质粒DNA转化大肠杆菌实验原理：转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程，其原理是细菌处于0℃CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀呈球形，转化混合物DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物贴附于表面，经42℃短时间热击，促进细胞吸收DNA复合物，将细菌放置在培养基中保温一段时间，促使在转化过程中获得新表型得到表达，然后将细菌培养物涂在含有Amp的选择培养基中。实验材料：大肠杆菌DH5α pUC19质粒实验试剂： LB固体培养基20mg/ml X-gal 40μl 200mg/ml IPTG 40μl 实验内容： 1.取200μl新配的感受态细胞加入DNA 2μl混匀，冰浴30min，同时用pUC19做两个对照：受体对照：200μl感受态细胞+2μl无菌水质粒对照：200μl 0.1M CaCl2溶液+2μl质粒D 2.将管放在42℃水浴中90s。 3.冰浴2min。 4.每管加800μl液体培养基，培养45min 5.加4μlIPTG和40μlX--gal混匀。 6.将混合液移至含有Amp（50mg/ml）的培养皿中，再用无菌涂布棒将菌液均匀涂满平板。 7.将适当体积（100μl）转化的感受态细胞涂在备好的培养基上。 8.倒置平皿37℃培养12--16h，出现菌落。实验结果： * * laz‘基因位点含抗生素不含抗生素结果分析受体对照组无菌落蓝斑菌落受体菌不是重组体 DNA对照组无菌落无菌落如有菌则操作时被菌污染转化实验组蓝白菌落，数量少（白:重组体蓝:菲重组体）蓝白斑菌，数量多（转化体、未转化体都生长）质粒已转入到受体细胞 *