超声波破碎高效液相色谱法定量检测核酸.pdfVIP

39 (FENXI HUAXUE) 9 第 卷 分析化学 研究简报 第 期 2011 9 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1442 ～ 1446 年 月 DOI :10． 3724 / SP． J． 1096． 2011． 01442 - 超声波破碎 高效液相色谱法定量检测核酸 * 董莲华 盛灵慧 王晶 黎朋 ( ， 100013) 中国计量科学研究院 北京 ， DNA ， 摘 要 采用超声波破碎结合高效液相色谱技术 建立了定量检测质粒 的方法 测量结果可以溯源至核 。 ( 300 W ， 24 kHz) DNA 200 ～ 500 bp 苷酸标准物质 采用超声波破碎 功率 频率 技术将质粒 破碎成 的小片段 DNA ， 4 (dCMP :3． 2 min ;dTMP :4 ． 7 min ;dGMP :5 ． 3 min ，dAMP : 再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为 种核苷酸 6． 8 min)， HPLC ， 。 pNK603 将产物通过 分离后 采用外标法进行定量分析 应用此方法对待测质粒 进行定量分 ， 4 (A∶ T = 0 ． 95 ，C∶ G = 0 ． 98) 。 (47 ． 24 析 测定的 种核苷酸的摩尔百分比 与理论值接近 本方法的测定结果 ! g / g) (PCR ，45 ． 98 g / g) PicoGreen (46． 02 g / g) 与实时荧光定量聚合酶链式反应 ! 和 荧光染料法 ! 的测定结果 ， -HPLC DNA 。 没有显著差异 表明建立的超声波 方法可以应用于质粒 的定量分析 ; ; ; ; 关键词 质粒 超声波破碎 高效液相色谱 荧光 聚合酶链式反应 1 引 言 ， 。 核酸是生物遗传信息的载体 对核酸的定量分析是解析核酸结构和功能的基础 目前定量分析核 : ， 酸的方法根据其原理的不同分为两类 一类是直接定量检测核酸 主要是通过应用标记探针的杂交反应 ; ， (EIA)、 、 进行定量检测 另一类是将待测核酸扩增后 再通过酶免疫法 发光分析 荧光分析等方法定量检 ， (PCR) 。