miR-196a-5p抑制小鼠胚胎干细胞的自我更新.pdfVIP

2014年 12月 基础医学与临床 December2014 第 34卷 第 12期 Basic ClinicalMedicine Vo1．34 No．12 文章编号：1001—6325(2014)12—1645-05 研 究 ~g-文 miR一196a一5p抑制小鼠胚胎干细胞的 自我更新 赵华路，姚 南，魏雪菊，王兰兰，张俊武，黄 粤，余 佳 (中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 国家医学分子生物学重点实验室，北京 100005) 摘要：目的研究miR一196a一5p在小鼠胚胎干细胞(mESC)自我更新中的功能。方法 定量PCR法确定miR一196a． 5p在mESC早期分化过程中的表达。在胚胎干细胞中过表达miR一196a．5p类似物 ，通过集落形成实验、细胞周期 分析、碱性磷酸酶染色和Oct4染色确定 miR一196a．5p过表达对 mESC自我更新及增殖的影响。结果 miR一196a一5p 在 mESC早期分化过程中表达上升(P0．05)，在 mESC中过表达 miR．196a．5p类似物后，ESC的集落形成及增殖 能力被明显抑制(P0．O1)，碱性磷酸酶活性下降，Oct4蛋白水平也出现明显下降。结论 miR-196a一5p具有抑制 mESC自我更新的能力，在 mESC早期分化过程中可能发挥重要作用。 关键词：miR．196a．5p；小鼠胚胎干细胞；自我更新 中图分类号：Q253 文献标志码：A miR-·196a-·5psuppressesself-renewalofmouseembryonicstem cells ZHAOHua—lu，YAONan，WEIXue~u，WANGLan—lan，ZHANGJunw·u，HUANGYue，YUJia (StateKeyLaboratoryofMedicalMolecularBiology，SchoolofBasicMedicinePUMC， InstituteofBasicMedicalSciencesCAMS，Beijing100005，China) Abstract：0bjective TostudytheroleofmiR-196a一5pinregulatingself-renewalofmouseembryonicstem cells (mESC)．Methods Q—PCRwasusedtodetecttheexpressionofmiR-196a一5pduringmESCearlydifferentiation． miR一196a一5pmimicswereoverexpressedinmESCs，andthethencolonyformationability，cellproliferation，Alka— linePhosphatase(AP)activityandOct4stainingofmESCweredetected．Results miR-196a-5pincreasedduring RA—induceddifferentiationandEB differentiationofmESC．OverexpressionofmiR一196a一5pinmESC couldinhibit thecolonyfomr ationandcellproliferationofmESCs．Meanwhile，miR-196a一5pdecreasedtheAPactivityandOct4 expressioninmESCs．Conclusions miR一196a-5psuppressesserf-renewalofmESCsand increasesduringmESC earlydifferentiationwhichsuggeststhatmiR一196a一5pmightplayimportantrolesinpromotingmESCdifferentiation． Keywords：miR一196a一5p；mouse