小麦根蛋白提取和双向电泳方法的优化和应用.pdfVIP

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论文摘要集 小麦根蛋白提取与双向电泳方法的优化与应用 郭广芳董坤 高利艳王顺利王轲晏月明‘ (首都师范大学生命科学学院,北京,100048) 蛋白质提取在2-DE技术中至关重要,但是小麦根部含有很多的次生代谢产物,使得电泳图像 的分辨率低和重复性差。因此,改进蛋白提取方法,使小麦根蛋白在2一DE图谱上得到理想的分离, 获得高分辨率、高灵敏度和高重复性的2-DE图谱是开展小麦根蛋白质组学研究的首要条件。本文 以京一411和中国春两个小麦品种为材料,优化了小麦根蛋白的提取过程,摸索了理想的蛋白上样 量,从而提高了双向电泳图谱的分辨效率,有利于今后对小麦根系蛋白质组学的分析和研究。主 要研究结果如下: 实验对比了Trizol抽提法和酚抽提法两种根蛋白提取方法的效果对比:Trizol抽提法能够明 显提高双向电泳图谱上蛋白点的总数量,此外,Trizol抽提法还明显改善了酸性端蛋白的分离效 果,没有出现横条纹和拖尾,图像清晰,而且背景颜色均匀。不同的化学试剂与蛋白质的亲和力 不同,因此不同的提取方法所得的2-DE图谱上蛋白点的数量、种类和丰度都会有所不同。 两种方法重复性的对比:双向电泳中,样品中盐离子的浓度、D1vr的用量以及各种环境因素等 诸多因素都极易影响其重复性,但是重复性又是双向电泳甚至是整个蛋白质组学技术研究中最重 要的环节。本实验进行了三次重复,Trizol抽提法所得的双向电泳图谱上蛋白点的数目变化幅度 不大,显示了很好的重复性。 蛋白提取是2-DE中关键的环节,直接影响电泳的分辨率、可靠性和重复性。植物根系蛋白提 取和电泳分离效果受到众多物质的影响,如酚类、醌类、色素以及其它次生代谢产物。本实验优 化了小麦根系蛋白质组的提取过程和电泳条件,得到了较理想的2-DE图谱。 适当的上样量直接影响2-DE图谱的可靠性。上样量过大,在重泡胀期和等电聚焦时蛋白容易 发生沉淀,影响聚焦效果,并且丰度较大的蛋白斑点相对较大,易于掩盖一些分子量差异不大的 低丰度蛋白点,横条纹和拖尾较为严重;如果上样量过低,低丰度蛋白在胶上难以显现,不利于 分析和研究根系在生长发育中或胁迫后蛋白质表达的上调和下调。本文摸索了较为理想的上样量。 基金项目:国家自然科学基金重点项目;国家“973”计划项目(2009CBll8303) 讯作者),博士生导师,主要从事小麦分子遗传与蛋白质组学研究。E-mail:yanym@hotmail.COm 75

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