猪APC基因家族在脂肪细胞分化过程作用.pdfVIP

·190· 第三部分 细胞工程与转基因 猪APC基因家族在脂肪细胞分化过程的作用 邵淑敏，蒋思文 (华中农业大学动物科技学院，湖北武汉430070) 引言 腺瘤样结肠息肉易感基因(APt?)基因是家族性结肠息肉瘤(FAp)以及散发性结肠癌的抑癌基因，该基因的突变 内功能，包括细胞间粘连、细胞骨架结构、调节斑珠蛋白水平、调节细胞增殖和分化、细胞凋亡和不对称干细胞分裂的 方向、控制细胞极化等，APC基因是否通过调节触atenin的水平调节脂肪细胞分化，进而影响脂肪形成，目前还没有 相关的研究。本文研究了猪APC基因家族在猪脂肪问充斥干细胞(ADSCs)向脂肪细胞分化中的作用，为进一步研究 其作用机制奠定理论基础。 材料与方法 采取2日龄大白仔猪的皮下脂肪组织，酶消化法分离猪ADSCs细胞，免疫组织化学和分子生物学方法鉴定猪 NA表达变化，Westernblot检测蛋白水平的表达变化。 结果 利用酶消化法成功分离到猪ADSCs细胞，细胞形态为长梭形，生长良好，可以稳定传代。免疫组织化学和分子生 细胞为猪ADSCs细胞。成脂诱导剂对猪ADSCs细胞进行成脂诱导处理后，发现诱导分化第2d，细胞形态改变，细胞 回缩变圆。有少量的脂滴形成；诱导第4d，脂滴数量逐渐增多。体积增大；诱导第8d，油红。染色后可见大量的脂滴形 成。实时定量RT—PCR检测脂肪形成早期、中期和晚期标志基因的表达，发现早期基因LPL的表达量逐渐增加，在诱 的第2d高表达，以后逐渐下调，axin在分化过程中的表达规律是先降低后升高的。 讨论与结论 APC通过调节触ateain的水平。抑制wnt信号传导通路．从而控制肠、皮肤、免疫系统、骨、脑中的细胞增殖和 表达，抑制脂肪细胞分化。本研究发现Wnt信号通路的负调节子APC基因家族在脂肪细胞分化早期高表达， 即眦砌的表达逐渐降低，其可能是通过调节fl-catenin的水平，激活脂肪形成早期转录因子表达，促进脂肪细胞的 中，其mRNA的表达趋势是不一致的，APC对脂肪细胞分化的调节作用机制还需做进一步的验证。 关键词：猪；A彤；基因家族；脂肪细胞；分化 致谢：本研究受国家863计划猪脂肪和肉质形成关键基因功能研究(200酣蚺102140)项目支持。