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NFY和RFX1对人PNRC启动子的调控作用.pdf

维普资讯 ISSN l007—7626 中国生物化学与分子生物学报 2007年 l2月 CN 11—3870/Q ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiol 23(12):988~995 NFY和 RFX1对人 PNRC启动子的调控作用 张 艳, 陈 彬, 陈 敏,李渝萍, 陈 健, 娄桂予,周度金 (第三军 医大学基础部 生物化 学与分子 生物 学教研 室。重庆 400038) 摘要 探讨核 因子 Y(nuclearfactorY,NFY)和调 节 因子 xl(regulatoryfactorsthatbindtotheXbox. RFX1)对人 RC(proline.richnuclearreceptorcoactivator)基因的调控作用及机制 .根据凝胶 电泳迁移 率变化实验 ,分析 NFY和RFX1与 PNRC启动子区域的结合 .将含有 NFY和 RFX1的真核表达质粒 (pCMV-NFY,pCMV.RFX1)和含有 PNRC启动子的荧光素酶报告基 因质粒共转染 HepG2细胞 ,检测 转染细胞的荧光素酶活性 ,并用 RT.PCR和Western 印迹检测 PNRC的表达情况.Quick.Change法对 PNRC启动子区NFY和 RFX1结合位点进行 突变,将包含 突变点的重组荧光素酶报 告质粒与含有 NFY和 RFX1的真核表达质粒共 同转染 HepG2细胞 ,检测各组荧光素酶活性 .结果发现 ,NFY和 RFX1能与 P,vRC启动子区域特异性结合;转染 pCMV.NFY和 pCMV.RFX1可抑制 PNRC启动子活 性并下调 PNRC在 HepG2细胞 中的表达;包含 NFY和 RFX1结合位点的突变质粒与 pCMV.NFY和 pCMV.RFX1共转染后 ,NFY和 RFX1对 PNRC启动子活性 的抑制作用消失 .以上结果提示,NFY和 RFX1能调控 PNRC基 因的表达,其机制是与 PNRC启动子 区域的特异性结合位点相结合,发挥其 反式抑制作用 . 关键词 富含脯氨酸核受体辅活化子 (PNRC);核因子Y;调节因子 X1;转录调节 中图分类号 Q78 RegulationofHuman PNRC Prom oterActivitybyNFY andRFX1 ZHANG Yna ,CHEN Bin,CHEN Min,LIYu.Ping,CHEN Jian,LOU Gui.Yu,ZHOU Du.Jin (DepartmentofBiochem~tryandMolecularBiology,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing 400038,China) Abstract This study was to investigate the regulatory mechna ism ofthe proline.rich nuclearreceptor coactivator(PNRC)promoteractivitybynuclearfactorY (NFY)nadregulatoryfactorsthatbindtotheXbox (RFx1).11heNFYnadRFXlexpressionvectors (pCMV.NFYandpCMV.RFx1)andtheluciferasereporter vectorcontaining the P,vRC promoterwere co.transfected into HepG2 cells.11he luciferase activity of transfectedcellswasdeterminednadtheexpressionofPNRC wasdetectedbyRT.PCR nad Westernblott

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