Nurr1基因修饰对神经干细胞分化为多巴胺能神经元的影响.pdfVIP

维普资讯 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2007Dec；42(6) 623 · Nurrl基因修饰对神经干细胞分化为多巴胺能神经元的影响 徐仿成，陈先文，胡慧敏，李小元 摘要 目的 观察Nurrl基因修饰原代培养的神经干细胞 NSCs电穿孔法转染携带Nurrl基因的重组质粒，来 (NSCs)体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法 用 观察其分化为多巴胺能神经元的作用。 电穿孔法将携带Nurrl基因的质粒转染 P3代 NSCs并进行 潮霉素筛选，24h后免疫细胞化学检测转染效果；并对转染 1 材料与方法 后的NSCs进行传代培养至 P6代，检测 Nurrl基因修饰的 1．1 实验动物与材料 SD大 鼠(孕 13～14d)由 NSCsNurrl表达效果，并进行分化实验 ，分化培养7d后免 安徽医科大学实验动物中心提供 (普通级)。高糖 疫细胞化学检测酪氨酸羟化酶(TH)的表达。对照组选用未 型D—MEM／F12无血清培养液 (GIBCO，USA)、B27 转染的NSCs。结果 电穿孔法转染 的NSCs24h后免疫细 胞化学检测到Nurrl高表达 ；传代至P6代 ，检测到 Nurrl较 (GIBCO，USA)、表皮生长 因子 (epidermalgrowth 高表达；对照组呈弱表达。分化实验表明：Null基因修饰的 factorEGF)和碱性成纤维生长因子 ((basicfiber NSCs分化的神经细胞中TH阳性比例 占27．20％±7．12％， growthfactor，bFGF)) (CytoLabLtd，USA)、dPBS 对照组为5．74％ ±1．81％；差异有显著性 (P0．01)。结论 (Hyclone，USA)、重组表达质粒 pcDNA3．1一hygro— Nurrl基因修饰可以促进原代培养的NSCs向多巴胺能神 Nurrl(由上海第二医科大学附属瑞金医院帕金森病 经元方向分化。 诊疗与研究中心提供)、潮霉素 (hygromycinB)(美 主题词 酪氨酸单氧化酶；细胞分化；电穿孔 ；神经元 国RocheDiagnostics公司)、兔抗 Nurrl多克隆抗体 自由词 Null基因；神经干细胞 (武汉博士德公司)和 鼠抗 TH单克隆抗体 (美 国 中图分类号 R329．1；R394 Sigma公司)。 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2007)o6—0623—04 1．2 神经干细胞原代和传代培养 在无菌条件下 取 SD胎鼠(孕 13～14d)大脑皮层 。加入 D—MEM／ 帕金森病 (PD)是由于黑质致密部多巴胺能神 F12无血清培养液，轻轻吹打成单细胞悬液，100Or／ 经元选择性地变性死亡所致 ，目前研究认为 PD是 min离心 10min，弃上清再加入培养液后吹打混匀， 较为适宜于干细胞移植治疗 的神经变性疾病之一。 细胞筛过滤、计数、台盼蓝染色检测细胞活力。将细 但实现神经干细胞(NSCs)移植治疗PD的临床应用 胞活力达90％以上的细胞以1×10。／L密度接种于 尚有一些关键性技术难题尚未解决，其中如何实现 培养皿，置于37oC、5％ CO：培养箱中、饱和湿度的 NSCs分化为足够数量的多巴胺能神经元是当前研